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请教各位老师,如何提取石蜡组织的DNA

llj19971997 离线

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楼主 发表于 2012-08-02 14:31|举报|关注(1)
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 我尝试提取石蜡组织的DNA,为什么量少,而且OD值只有1.5.

请给位老师给我指点一下。关键在哪几步?

具体是8um,三张切片。二甲苯脱蜡过夜。酒精脱苯(此时在75度,20min)。用裂解液孵育1h,再加蛋白酶k至终浓度为500ug/ml过夜(55度)。平衡酚提取一次,酚/氯仿/异丙醇提取一次,氯仿/异丙醇提取一次。加入1/10的乙酸钠,二倍体积的无水乙醇,-20度过夜,离心。加70%乙醇离心,用高压灭菌的水溶解。

在整个提取过程中没有看到明显的沉淀,为什么呢?

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llj19971997 离线

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7 楼    发表于2012-08-31 09:22:55举报|引用
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谢谢回复。

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5 楼    发表于2012-08-28 08:54:08举报|引用
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我们老大同意买试剂盒,可是咨询了一下,包埋时间长就会有影响。现在包埋已经超过十年了,好像不行了。DNA提取后后期PCR有难度了。各位老师,这种蜡块是不是不适合做实验了?

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4 楼    发表于2012-08-17 08:22:48举报|引用
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谢谢3楼的老师。可是现在买的都是试剂而没有试剂盒,所以只能摸索着做了。呵呵

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2 楼    发表于2012-08-10 14:18:24举报|引用
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谢谢。

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