楼主 发表于 2010-10-02 22:06|举报|关注(0)

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    做免疫组化过程中遇到了难题，尝试了许多方法都无法解决，恳请大家的帮助。

    我要检测的抗原是OA软骨中的X型胶原，一抗是abcam公司的产品，货号：ab49945，小鼠抗人单克隆抗体，类型为IgM，二抗购自JacksonImmunoResearch公司，兔抗鼠IgM（Peroxidase-conjugated Affinipure Rabbit Anti-Mouse IgM,μChain Specific (mimimal cross-reaction to Human Serum Proteins)）。步骤：免疫组化常规烤片，脱蜡，入水后，3%的过氧化氢室温阻断10min，胃蛋白酶37℃消化半个小时，然后用兔血清封闭30min，倾去血清后，加一抗，4℃过夜；加二抗，室温孵育一个小时，最后DAB显色，结果整张切片都是很深的背景着色，将一抗稀释到1:2000，二抗稀释到1:400，仍然是整张切片都是较深的背景着色。

    一起做的还有II型胶原，一抗的类型是IgG，也是购自abcam公司，二抗也是Jackson公司的，步骤也相同，就染的很好，没有出现上面的问题。

    请问，是不是因为一抗是IgM的原因，所以出现这么强的背景着色，那么有没有什么解决方法呢？跪求各位高手指点！

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