楼主 发表于 2006-10-24 11:50|举报|关注(0)

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1 楼    发表于2006-10-24 12:27:00举报|引用

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可能是让epitope(表位)恢复得更加好一点.

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2 楼    发表于2006-10-24 12:33:00举报|引用

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呵呵，乱解一下。自然冷却可能的作用就是相当于修复的时间长了一些。可以做个试验。第一组标本按正常修复时间修复并自然冷却。第二组延长修复时间并快速冷却，并且又可分延长时间的不同，看看此时出来的效果，如果延长的某一时间的结果与自然冷却的一样，那么这个问题就解决了。
你试试吧，无非浪费一些试剂。

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岂能尽如人意，但求无愧我心！

3 楼    发表于2006-10-24 22:09:00举报|引用

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由于常规石蜡切片标本均用甲醛固定，使抗原性物质由于形成醛键、羧甲键等原因而被封闭了部分抗原决定簇，或者由于蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐藏.抗原需要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，恢复抗原的原有空间形态。
加热抗原修复后必须经过室温自然冷却20～30min，原因是使未折叠的蛋白分子链恢复天然构型,如果采用快速冷却可能会使蛋白分子复性时破坏天然结构,影响免疫反应!

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4 楼    发表于2006-10-24 22:11:00举报|引用

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1.加热后必须经过室温自然冷却20~30分钟，使未折叠的蛋白分子链恢复天然构型
2.抗原修复持续时间过后，取出放于室温中让其慢慢地降温，决不能为了争取时间，强行用冰块或冷水令其降温。这是因为当高温中的抗原蛋白分子链脱离了其它的束缚或联结，要有一个自然环境让其自然放松下来，随着温度的降低，它们会慢慢地恢复原来的形态和构型。如果用冰块和冷水强行令其降温，松开后的蛋白分子肽链突遇降温而固定下来，恢复不了原有的构型，达不到预想的效果。

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5 楼    发表于2006-10-24 22:49:00举报|引用

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听完了诸位老师精彩的解释，我感觉自己都变成了一个蛋白质分子，躲在一群分子之间，看它们如何象水母一样变幻。

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“人生没有彩排，每一天都是现场直播”

6 楼    发表于2006-10-25 02:40:00举报|引用

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继续困惑
请教
 frankbj  ：“使未折叠的蛋白分子链恢复天然构型” 、“蛋白分子复性”

 漠北 ：“松开后的蛋白分子肽链突遇降温而固定下来”

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7 楼    发表于2006-10-25 09:52:00举报|引用

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鸽子斗胆，将手头有的资料贴于此，仅供参考，切莫见笑。

如不及时快速降温，抗原修复过程会继续进行，从而造成组织抗原在高温条件下暴露时间过长。

高温抗原修复是否会影响组织形态或导致抗原的丢失，与以下三个因素有关：1）组织固定时间；2）抗原修复时间；3）在设定温度下的持续时间。

有实验表明，加热后，容器内温度随时间的推移变化非常缓慢，差不多一分钟降一度。说明停止加热后，组织仍然在相当长的一段时间处于高温状态。

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8 楼    发表于2006-10-25 09:55:00举报|引用

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对不起，鸽子没有针对楼主关于“自然冷却”的问题讨论，跑题了。

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9 楼    发表于2006-10-25 13:20:00举报|引用

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以下是引用liuyong 在2006-10-25 2:40:00的发言： 继续困惑

继续困惑

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10 楼    发表于2006-10-25 13:29:00举报|引用

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肉片放在锅里炒熟后经过室温自然冷却20~30分钟, 肉片会变回生肉片吗?

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11 楼    发表于2006-10-25 23:40:00举报|引用

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以下是引用shanghainese 在2006-10-25 13:29:00的发言： 肉片放在锅里炒熟后经过室温自然冷却20~30分钟, 肉片会变回生肉片吗?

肉片不会，不过好像有一种东西会 。一下子想不起来。。。好像是淀粉类的食品，凉吃就象是不熟。但愿不是记错了。

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“人生没有彩排，每一天都是现场直播”

12 楼    发表于2006-10-26 12:05:00举报|引用

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以下是引用197 在2006-10-25 23:40:00的发言： 以下是引用shanghainese 在2006-10-25 13:29:00的发言： 肉片放在锅里炒熟后经过室温自然冷却20~30分钟, 肉片会变回生肉片吗? 肉片不会，不过好像有一种东西会 。一下子想不起来。。。好像是淀粉类的食品，凉吃就象是不熟。但愿不是记错了。

现在不仅仅困惑
开始晕了

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13 楼    发表于2006-10-26 12:45:00举报|引用

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以下是引用liuyong 在2006-10-26 12:05:00的发言： 现在不仅仅困惑 开始晕了

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14 楼    发表于2006-10-26 23:39:00举报|引用

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真的，请大家留心食谱。
看不下食谱时，吃点晕车片。

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“人生没有彩排，每一天都是现场直播”

15 楼    发表于2006-10-27 09:35:00举报|引用

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以下是引用liuyong 在2006-10-27 0:10:00的发言： 狂晕

       真的狂晕了吗？
       没关系，放入高压锅内热修复15分钟，然后自然冷却就好了

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岂能尽如人意，但求无愧我心！

16 楼    发表于2006-10-27 12:10:00举报|引用

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狂晕

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17 楼    发表于2006-10-27 22:49:00举报|引用

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以下是引用王俊涛 在2006-10-27 9:35:00的发言：        真的狂晕了吗？        没关系，放入高压锅内热修复15分钟，然后自然冷却就好了

这才是真正的 Retrieval.

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18 楼    发表于2006-10-28 13:40:00举报|引用

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请问各位老师用微波炉修复抗原的步骤和时间，谢谢！急！！！

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干到老学到老

19 楼    发表于2007-01-20 23:15:00举报|引用

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 一直没搞懂，象原位杂交，必需快速冷才能使打开的DNA双链不会再结合回去。是不是免疫组化正好相反？我个人感觉没什么道理，自然冷却的确比快速冷却结果强一点，但背景也相应高一点，可能主要是与切片在自然冷却中在高温中停留的时间长久有关，这与抗原修复时间延长但快速冷却结果差不多。这抗原修复的强度是与温度与时间相关呢还是与冷却速度相关，这个问题还真不明白。

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本人观点纯属个人偏见，希望大家独立判断，正确引用！中华病理技术网：http://www.zhbljs.com/

20 楼    发表于2007-02-08 12:55:00举报|引用

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 今天实验证明微波抗原修复后放通风厨里降温时间明显缩短，而且背景也很干净，一点也没影响结果。

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华夏病理群1：35164959（已满）；华夏病理群2：40555921（已满）；华夏病理群3：38905768（已满）；华夏病理群4：64603316（请进）