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- 求助：冰冻切片免疫组化问题
根据文献，我准备做大鼠脑fos基因免疫组化染色。实验步骤大体是：大鼠分批戊巴比妥钠腹腔注射深度麻醉，先用生理盐水心脏灌流以去除血液，再用多聚甲醛灌注固定，取脑，多聚甲聚后固定，蔗糖浸泡至沉底，冰冻切片。因为大鼠分批处死，所以，切片在冰冻液中-20C保存。等全部动物处理完毕后，一起免疫组化染色。
请各位指教：
1。根据文献，切片可以在冰冻液中-20C保存数月至一年，仍保留免疫活性。那么我们先不切片，把脑组织放入冰冻液中，能不能长时间保存？
2。石蜡切片免疫组化染色时，是先裱片、固定，再染色。请问：冰冻切片也是先裱片再染色吗？
其它问题及注意事项，请一并指教。
多谢！
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| 以下是引用sdnick在2010-3-20 10:54:00的发言：
根据文献，我准备做大鼠脑fos基因免疫组化染色。实验步骤大体是：大鼠分批戊巴比妥钠腹腔注射深度麻醉，先用生理盐水心脏灌流以去除血液，再用多聚甲醛灌注固定，取脑，多聚甲聚后固定，蔗糖浸泡至沉底，冰冻切片。因为大鼠分批处死，所以，切片在冰冻液中-20C保存。等全部动物处理完毕后，一起免疫组化染色。 请各位指教： 1。根据文献，切片可以在冰冻液中-20C保存数月至一年，仍保留免疫活性。那么我们先不切片，把脑组织放入冰冻液中，能不能长时间保存？ 2。石蜡切片免疫组化染色时，。请问：冰冻切片也是先裱片再染色吗？ 其它问题及注意事项，请一并指教。 多谢！ 对于你的问题我的建议是，将所有动物标本取材后有液氮保存，在你需要时一并切片。但是有个问题是你在做所有动物标本前要先做预实验啊。 至于免疫组化方法学并不困难，就是先裱片、固定，再染色，不过固定最好用丙酮，要不你可能做不出来的，还有过氧化氢阻断后要注意多水洗，把那些气泡洗去才行啊。 不知对你是否有帮助，望你成功。 |
- 陈森林
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