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宫颈液基细胞学制片质量问题专贴

清香情浓 离线

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楼主 发表于 2010-02-04 10:01|举报|关注(3)
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细胞学专区开设的几个专栏,更多的是关于诊断方面的讨论。但是很多帖子争论激烈,并不是由于病例本身有多么疑难,而是由于制片质量太差,诊断标准实在无从把握,只好连蒙带猜的发表意见。这样的讨论虽然热烈,可并不能给我们的实际工作解决更多的问题,也许下一次碰到了还是弄不明白。因此在开设安必平专栏的时候,我就有这么一个想法,一定要将病理技术与病理诊断更好的结合起来,为大家带来一些实用性更强的资料,同时也希望更多的诊断医生关注制片质量,解决制片质量,只有这样才能更好的推动液基细胞学的发展。由于以前没留意收集一些制片质量不好的片子,因此先建立这样一个宫颈液基细胞学制片质量问题转帖,大家能把一些工作中碰到的问题集中起来,便于交流讨论,更便于同行之间互通有无,相互学习,借鉴。

液基细胞学的开展与推动,一定需要细胞学诊断医生更多的关注液基细胞制片质量,通过镜下观察,指导病理技术人员解决制片中出现的各种问题。我个人从事液基细胞学制片工作有5年多时间,制片数量超过5万例,我愿意和大家一起交流讨论制片方面的心得。两位版主hay老师和 zhangjianxin老师,开展液基制片的时间更早,经验也更加丰富,我相信通过我们的努力,大家共同参与,一定能为液基细胞学的发展做更多有意义的工作。

一张好的液基制片,不管诊断如何,起码看起来人都感觉要舒服很多。哪怕就从这样一个小小的改变开始,都希望大家长期关注此贴。

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清香情浓 离线

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1 楼    发表于2010-12-13 09:15:00举报|引用
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以下是引用jwpower在2010-12-12 21:25:00的发言:

 在网上读片,遇见了很多种的液基系统制出的细胞片,虽然都有“三证”,但实在存在很大差异,想请教彭老师一个问题:评价一个液基系统制片好坏的标准是什么呢?

对于液基细胞学制片好坏的标准评估,我觉得就是看制片效果能否有效的提高诊断准确性与阳性检出率。具体来说我觉得可以从以下几个方面评估:

1。细胞量是否足够。很多产品的制片细胞量少,甚至达不到TBS报告系统要求的最低标准(大于5000个形态完整的鳞状上皮细胞),细胞量不够的产品会大大降低阳性检出率。

2。细胞平铺是否均匀。决定这点的因素主要是产品去除杂质的效果好坏以及制片原理所决定的,当然也跟载玻片的处理技术相关,有些技术的制片容易出现周边多,中间少,细胞易聚集成团的现象,这些会影响诊断的准确性。

3。细胞染色效果是否清晰,鲜明。好的染色效果需要优质的染液及标准化的制片流程才能保证,这些是需要较高成本及核心技术的,也是判断液基制片效果好坏的一个重要标准,更是跟医生平时日常工作息息相关的。只有核浆对比鲜明,细胞核信息表达清晰的细胞才是有诊断价值的细胞,网站上很多争议多的帖子其实都是由于染色效果不好,看不清核的细微结构,甚至分不清楚细胞界限所造成的。

当然还有很多可以作为判断好坏的标准,但我认为以上几点是非常重要的。仅供参考。

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jcw62

lwj3246
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清香情浓 离线

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2 楼    发表于2010-05-11 06:48:00举报|引用
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如果不注意制片环境及操作流程,制片中经常会见到污染成分。特别是一些形态与念珠菌类似的污染菌,往往会影响到我们的判读结果,可以从以下几个方面加以鉴别:

1.,看整体:污染菌常漂浮在片子中,或者是单独出现背景中,多的时候彼此缠绕如杂草一般。念珠菌感染则常常串起在鳞状上皮团之间。

2,看反应性改变:污染菌不引起细胞的增生,也不引起细胞的虫蛀样改变及嗜双色改变。念珠菌感染可以引起鳞状上皮的普遍性增生,有较明显的反应性改变。

3,看具体形态:污染菌染色常较浅,多为灰红色或蓝绿色,念珠菌为红色;污染菌无竹节状典型特征,多为面条状或串珠状;污染菌的芽孢不如念珠菌典型,或没有。

4,看出现概率(很简单也很重要):一批制片中如果出现菌丝的比例过高(个人觉得超过30%),首先要考虑污染。

解决污染的方法:

1.,彻底清洗机器管道

2,检查载玻片,盖玻片是否清洁

3,更换自配的试剂,特别要注意清洗试剂瓶,污染菌往往长在瓶壁与瓶底

4,实验室环境差的话,建议安装紫外线灯

2

kelan121..

jcw62
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全子 离线

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3 楼    发表于2010-03-18 21:47:00举报|引用
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 我们经常有这种现象,期待解决
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阳光男孩
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清香情浓 离线

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4 楼    发表于2010-03-19 07:45:00举报|引用
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本帖最后由 于 2010-03-19 08:40:00 编辑
以下是引用全子在2010-3-18 21:49:00的发言:

 还有我们的液基片子为什么几个月前的都褪色很厉害,收集的典型病例无法复习

褪色主要是表现在胞浆部分,当然细胞核也会有部分褪色,判断的标准就是看核是蓝色还是略带紫红色,后者说明核也有部分褪色了。

原因主要在于以下几种情况:1.染色过程中,EA/OG的上色不够,其实胞浆染色时间适当久一点,在镜下不会有太多影响,可对防止片子过早褪色是有帮助的。2.染色过程中的PH值控制不好,一般来说这样的情况是由于偏碱所致,EA/OG在碱性环境中不容易上色,即使上色了其结合性也不好,时间久了就容易褪色。3.染色完成以后,片子在酒精中浸泡时间过久,EA/OG的上色很大程度上是一种物理作用,酒精浸泡会使其褪色并影响长时间的保存。4,封片时候的中性树胶用二甲苯稀释过多,很多时候制片员为了封片方便,会将中性树胶调得很稀,这样封出来的片子,密封性不好,时间久点也会使其褪色,尤其会影响到苏木素的着色。

如果片子褪色严重,又想复习的话,建议完全褪色后重染。可将片子泡在二甲苯中,待盖玻片脱落(时间久的片子可能要泡一天左右)。待二甲苯挥发完全,再用无水酒精泡(切不可直接用水清洗,否则片子要成大花脸了!),然后水洗,接着用1%盐酸酒精使其苏木素完全退干净,(可在此加一步1%氨水清洗),水洗(最好用流水)后用酒精固定,就可以按正常步骤染色了。

以上分析只是个人经验,希望对全子老师有所帮助。

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海浪信使 离线

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5 楼    发表于2010-04-10 17:44:00举报|引用
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以下是引用掌心0164在2010-3-26 13:25:00的发言:

以下是引用清香情浓在2010-3-23 15:47:00的发言:

以下是引用掌心0164在2010-3-19 8:55:00的发言:

以下是引用清香情浓在2010-3-17 13:44:00的发言:

陆续上传一些制片过程中发现的问题,欢迎大家参与讨论。

 

细胞中出现这些物质,大家也许碰到过吧,是由于什么原因造成的呢?如何解决?

很常见的现象,英文叫:Cornflaking现象(我翻译:麦麸样或麦片样现象),不知道准确的翻译;如果细心注意主要这种现象常累及成熟的鳞状上皮细胞;其本质就是小的气泡聚集在一起,主要是在封片过程造成的;可以脱去二甲苯之后重新封片来解决。

不知道掌心是否能解释得更加清楚些,这个现象的确是由于封片引起的。但具体是哪步环节没注意导致?怎么解决就能完全避免?

    说实话,回答这个问题我很难做出很科学而详细的解释;只是遇到这种现象找了一下原因。但是在实际工作中如果用湿性封片(过了二甲苯马上加树胶封盖)这种现象就很少见,我是在想是不是还是与片子晾干再封片或树胶本身不纯或者树胶分布不均扩散速度不一致等等都是各人猜测。一些小的气泡聚集(这些小气泡肉眼很难看到),一般来说这种现象不严重的时候不影响判读。至于这种现象能否杜绝我没有办法回答。由于做技术是我偶然为之的工作,很多技术问题我也是求教我们的技术员和技术专家;我很难回答的全面或正确与否。但是这种现象可以通过湿性封片来减少。

如果酒精的浓度达到要求、在酒精中的时间达到要求,那么如轮你是湿性封片还是晾干封片,这种现象就不会出现了!
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lwj3246
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菊形团 离线

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6 楼    发表于2010-02-04 20:30:00举报|引用
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 好的片子是做出好的诊断的前提,非常赞同楼主的意见。如果通过讨论能得出公认的优质标准就好了

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小熊宝
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  • 坏蛋:  好像不同的厂家,液基的操作方法不太一样吧,这个怎么解决?
    2012-10-03 08:28

幸运草 离线

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7 楼    发表于2010-09-12 19:30:00举报|引用
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本帖最后由 于 2010-09-12 19:54:00 编辑
以下是引用掌心0164在2010-2-4 21:39:00的发言:

 制片质量的前提需要临床医生有好的取材、好的固定、好的技术员好的制作、好的染色和好的封片。每一步都严格按照标准来就行;但是标准何在?人员如何培训?

质量控制,难做啊
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坏蛋
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新学生 离线

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8 楼    发表于2010-04-30 22:53:00举报|引用
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以下是引用清香情浓在2010-4-26 10:10:00的发言:

随着气温回暖,雨水增加,许多地方(南方尤其严重)的制片中都会出现污染现象,对诊断及阅片心情都会造成影响。

那么怎么判断是污染还是来源于标本本身?请有经验的网友参与讨论。

 

图片中的现象我也遇到过。经管道冲洗及新配次缓液后重新制片,上述现象消失。可以证明不是标本的问题,应该是制片过程中污染。
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灵草仙芝
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清香情浓 离线

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9 楼    发表于2010-03-17 13:44:00举报|引用
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陆续上传一些制片过程中发现的问题,欢迎大家参与讨论。

 

细胞中出现这些物质,大家也许碰到过吧,是由于什么原因造成的呢?如何解决?

  • 图1
  • 图2
  • 图3
  • 图4
  • 图5
  • 图6
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  • jcw62:  我们常能碰到这样的问题,什么原因?如何解决?
    2012-10-02 07:41
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linyguo 离线

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10 楼    发表于2010-03-17 16:51:00举报|引用
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 片子未干时,中性树胶封固
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  • 坏蛋:  现在一般都是湿封片了吧
    2012-10-03 08:27

清香情浓 离线

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11 楼    发表于2010-03-18 08:46:00举报|引用
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以下是引用linyguo在2010-3-17 16:51:00的发言:

 片子未干时,中性树胶封固

制片完成后,经酒精脱水,二甲苯透明后,湿封片。因此不是这种情况导致的。
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海浪信使 离线

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12 楼    发表于2010-03-18 16:58:00举报|引用
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以下是引用清香情浓在2010-3-18 8:46:00的发言:

以下是引用linyguo在2010-3-17 16:51:00的发言:

 片子未干时,中性树胶封固

制片完成后,经酒精脱水,二甲苯透明后,湿封片。因此不是这种情况导致的。

酒精脱水不彻底(多是时间不足或试剂更换不及时)后透明造成这种雾状水滴现象。
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风雪夜行人 离线

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13 楼    发表于2010-03-18 22:59:00举报|引用
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 我们经过了半年的磨合,在封片关上已经没什么大的问题了。这样形成往往是二甲苯干后封片造成的,所以一次只能封几张片。我们的技术员操作得不错。
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掌心0164 离线

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14 楼    发表于2010-03-19 08:55:00举报|引用
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以下是引用清香情浓在2010-3-17 13:44:00的发言:

陆续上传一些制片过程中发现的问题,欢迎大家参与讨论。

 

细胞中出现这些物质,大家也许碰到过吧,是由于什么原因造成的呢?如何解决?

很常见的现象,英文叫:Cornflaking现象(我翻译:麦麸样或麦片样现象),不知道准确的翻译;如果细心注意主要这种现象常累及成熟的鳞状上皮细胞;其本质就是小的气泡聚集在一起,主要是在封片过程造成的;可以脱去二甲苯之后重新封片来解决。
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掌心0164

mingfuyu 离线

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15 楼    发表于2010-03-19 09:43:00举报|引用
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 分享一下我们(我想多数美国的细胞病理医生都差不多)怎么做:

1.如何判断医生取材部位准确?判读标准是什么?外公颈和阴道都是鳞状上皮,我们分不开,靠临床医生告诉我们。移形区有内宫颈腺上皮或/化生细胞。当然内宫颈是腺上皮细胞。

2.如何判断医生取材力度适中?判断指标有哪些?力度我们管不了,也无所谓,但必需给足够鳞状上皮才算满意样本。液基要5000+鳞状上皮,conventional 更多,相当于7+/-细胞/40X视野。

3.取材中的注意事项有哪些,以下情况怎么跟临床医生要求:月经期不能取样,干净几天后可以开始取样?阴道冲洗,阴道用药后对取样时间有无要求?同房过后对取样时间有何要求?我们并不要求月经期或同房后不能取样,但读片人必需认清子宫内膜细胞(经期涂片)和精子。有时经期涂片血太多,需酸洗。阴道冲洗,阴道用药我们没注意到问题,各种细胞病理和妇产科协会也没任何提议。

4.取样过程中遇到出血情况如何处理?宫颈糜烂,分泌物过多时如何处理?血多影响制片(blood clots filter and reduce squamous cellularity)时酸洗。没注意到宫颈糜烂,分泌物过多会对制片质量有影响。有时细胞胞浆丢失成裸核,不一定是取样或制片的问题,可能和月经周期有关。

5.孕期妇女如何取样,时间如何规定?无特殊规定。读片小心,孕期有时呈萎缩状。

6.老年性妇女取样有无特殊要求?无。有时细胞数太少。建议临床医生给intravaginal estrogen cream (如无禁忌症)一周后取材。

取样不满意时,我们又通过什么样的形式与临床沟通最适合呢?午饭或路上碰到非正式谈,打电话,或写在报告的comment里面。

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清香情浓 离线

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16 楼    发表于2010-03-22 08:57:00举报|引用
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本帖最后由 于 2010-03-23 08:38:00 编辑

 谢谢mingfuyu老师带来国外的观点,非常好的学习资料。我就其中某些不同的观点做如下讨论:

1.这个问题是一致的,判断取材部位是否准确,主要是看有无颈管腺细胞。当然具体要说看到多少,这个就没有明文规定了,我个人的经验一般是单个看见10个以上,成团的看见一团即可。

2.取材力度的问题,是可以通过镜下观察来判断的。这点我不是很赞同“我们管不了”。在我们国内,取材很多时候都是由实习同学操作的,我就发现力度大小她们把握得不是很好,带来许多实际问题。力度过大的表现是:出血性的标本比较多,镜下也常见组织片。取材力度过小的表现是:细胞量往往不足。这些判断标准不是根据一个两个标本,而是根据同一取材医生多个标本来判断的。当我们发现力度不适合的时候,跟取材医生电话沟通,或是规范取材人员,是比较好的解决办法。

3.第三个问题国外跟国内的要求不一样,国内一般不在月经期取样,也常要求尽量不要取样前阴道用药,同房等。对经期涂片的判读也是国内医生面临的一个课题。

4.出血的问题是取材中需要认真对待的,血液及黏液对制片还是有很大的影响。遗憾的是临床医生常常不经过任何处理。不知道国外的临床医生是如何具体面对这些问题?

5.孕期妇女取样,国内也无一致标准,我见得多的是孕中期取样。孕早期和晚期取样,国内与国外的观念不太一样。

6.老年性妇女取样最常碰到的问题就是宫颈萎缩,取样刷很伸入宫颈管。且围绝经期和绝经期的妇女,由于雌激素水平降低,宫颈萎缩,移形带常移至宫颈管内。所以常出现细胞数量少,颈管细胞未见,成片脱落的副基底层细胞等现象,归纳起来说就是“萎缩的背景”。

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17 楼    发表于2010-03-23 15:51:00举报|引用
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下面这两幅图中的东西又是什么原因造成的呢?跟前面提到的在细胞胞浆里出现的棕褐色物质是一样吗?感兴趣的朋友不妨发表下高见。
  • 图1
  • 图2
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掌心0164 离线

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18 楼    发表于2010-03-26 13:25:00举报|引用
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以下是引用清香情浓在2010-3-23 15:47:00的发言:

以下是引用掌心0164在2010-3-19 8:55:00的发言:

以下是引用清香情浓在2010-3-17 13:44:00的发言:

陆续上传一些制片过程中发现的问题,欢迎大家参与讨论。

 

细胞中出现这些物质,大家也许碰到过吧,是由于什么原因造成的呢?如何解决?

很常见的现象,英文叫:Cornflaking现象(我翻译:麦麸样或麦片样现象),不知道准确的翻译;如果细心注意主要这种现象常累及成熟的鳞状上皮细胞;其本质就是小的气泡聚集在一起,主要是在封片过程造成的;可以脱去二甲苯之后重新封片来解决。

不知道掌心是否能解释得更加清楚些,这个现象的确是由于封片引起的。但具体是哪步环节没注意导致?怎么解决就能完全避免?

    说实话,回答这个问题我很难做出很科学而详细的解释;只是遇到这种现象找了一下原因。但是在实际工作中如果用湿性封片(过了二甲苯马上加树胶封盖)这种现象就很少见,我是在想是不是还是与片子晾干再封片或树胶本身不纯或者树胶分布不均扩散速度不一致等等都是各人猜测。一些小的气泡聚集(这些小气泡肉眼很难看到),一般来说这种现象不严重的时候不影响判读。至于这种现象能否杜绝我没有办法回答。由于做技术是我偶然为之的工作,很多技术问题我也是求教我们的技术员和技术专家;我很难回答的全面或正确与否。但是这种现象可以通过湿性封片来减少。
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  • 坏蛋:  是不是湿封片的时候,一下把全部片子都拿出来了,在一张一张的封片,我觉得,在二甲苯中,封一张拿一张,就不会出现这样的问题了
    2012-10-03 08:34
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掌心0164

lwj3246 离线

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56 楼    发表于2013-07-22 16:47:47举报|引用
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 我的经验:当酒精浓度不够时,看似片子干了,实际上还有水份,此时封片就会出现褐色斑点。解决的办法当然是首先更换酒精,让脱水不再有水分; 其次是脱水后让片子干透,可以稍延长烘干的时间,再透明,湿封片。

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学海无涯

清香情浓 离线

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20 楼    发表于2010-02-05 09:12:00举报|引用
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以下是引用掌心0164在2010-2-4 21:39:00的发言:

 制片质量的前提需要临床医生有好的取材、好的固定、好的技术员好的制作、好的染色和好的封片。每一步都严格按照标准来就行;但是标准何在?人员如何培训?

掌心说得不错,一张好的制片的确包括从取材到制片的各个环节。缺少标准是一个原因,还有一个原因就是标准不可能完全被严格执行,或者说在执行标准中只有发现了问题,才能去改正。

液基细胞学如今发展很迅速,很多标准都没有制定出来,通过大家的讨论,发现问题,解决问题是这个阶段的需求。

从标本的取材开始,就有很多问题需要明确,首先要求使用一次性宫颈取样刷,取材时把毛刷中间较长的部分插入宫颈管,外侧毛刷抵住宫颈外口,力度适中的推向宫颈,并按顺时针方向旋转3到5圈。那么这里就有几个问题需要讨论了,怎么保证临床医生取好材?取不好全是临床医生的责任吗?我觉得,责任首先在于阅片医生。因为临床医生取材是否满意,是需要我们根据镜下观来判断的。镜下判断的标准有哪些,跟临床医生最相关的是什么,我先提几个问题,请关注过的朋友积极讨论。

1.如何判断医生取材部位准确?判读标准是什么?

2.如何判断医生取材力度适中?判断指标有哪些?

3.取材中的注意事项有哪些,以下情况怎么跟临床医生要求:月经期不能取样,干净几天后可以开始取样?阴道冲洗,阴道用药后对取样时间有无要求?同房过后对取样时间有何要求?

4.取样过程中遇到出血情况如何处理?宫颈糜烂,分泌物过多时如何处理?

5.孕期妇女如何取样,时间如何规定?

6.老年性妇女取样有无特殊要求?

取样不满意时,我们又通过什么样的形式与临床沟通最适合呢?

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