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病理组织石蜡切片制作常见问题解析

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楼主 发表于 2016-01-29 16:18|举报|关注(8)
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 病理组织石蜡切片制作常见问题解析

病理组织石蜡切片制作常见问题解析图1

石蜡切片的制作是病理科检验人员的常规工作之一,也是病理检验的的一个重要环节。组织切片质量好坏直接关系病理诊断的准确性。

病理组织石蜡切片制作常见问题解析图2

制作方法

固定取材

1临床所取标本要新鲜,否则细胞内溶酶体会破裂,造成细胞自溶。

2组织固定液多选用10%中性福尔马林,福尔马林最好现配现用

3固定液体积要超过标本的1020倍,否则固定不充分,影响染色

4固定标本的容器要以使标本不变形为宜

 

脱水

1乙醇脱水能力较强常使组织过度收缩和变脆除根据组织种类、组织块大小和固定剂的不同严格控制脱水时间外取从低浓度10%乙醇开始逐步升级组织块中的水分逐渐被脱出避免因脱水过度引起组织收缩、硬脆、切片时蜡带散裂。

2在脱水时用滤纸吸去组织块多余的水分并用吹风机将其吹干确保各级乙醇的浓度尤其是无水乙醇。

3根据硫酸铜遇水变蓝的原理检测无水乙醇内是否有水并及时更换确保组织脱水彻底

 

浸蜡

1由于蜡箱上部与底部温差是8℃左右在蜡箱上部放1个温度计只能显示蜡箱上部的确切温度。为避免温差对组织浸蜡带来不利通常在蜡箱的中部与底部各放1个温度计显示各部的真实温度把组织放在蜡箱相适宜的部位内浸蜡。

2较大的组织在软蜡和硬蜡内的时间要把握好组织在浸软蜡时可以适当延长时间在硬蜡内时间不可过长因为硬蜡内的温度较高浸蜡总体时间不可太长否则会引起组织过度收缩变硬、变脆、切片易碎裂、降低切片质量甚至失败浸蜡时间也不可过短否则蜡不能完全浸入组织中切不出完整的切片。

 

1盐酸乙醇分化步骤尤其重要,分化的目的是使胞核染色,而无背景色。

2明矾苏木精性质使其在酸性溶液中呈现红色,在碱性溶液中呈现蓝色。在盐酸乙醇分化时,切片由深蓝变为粉红色时,应停止分化。

3分化时,有经验者可以肉眼观察切片至粉红色时终止分化,初学者可镜下多次观察切片,至切片除胞核外,无其他背景着色时,停止分化;或是依据盐酸乙醇浓度,确定分化时间试剂初配制时,盐酸乙醇浓度高,分化时间短,反之则分化时间延长。

4切片分化完成后,将切片移至弱碱性的溶液中返蓝,一般采用自来水,或是温度在50℃的自来水中,因其本身为弱碱性,且取用方便,所以被广泛使用。

 

封片

1需吹干或烤干切片上水分,否则镜下观察时有一层白雾,导致细胞轮廓不清楚

2病理组织切片HE染色一般采用中性树胶封片,封片时以无气泡为准,否则会影响镜下观察

3常用24 ×32 mm大小的盖玻片,只需用一次性的巴氏吸管滴2滴中性树胶即可,过少则致封片不完全,过多则致中性树胶外溢。

病理组织石蜡切片制作常见问题解析图3

问题分析

切片过厚

1切片机厚薄调节旋钮错误设置

处理方法:检查旋钮,正确调整,一般设定为3~5μm

2切片时出现不正当操作(如手腕下压、切刀回拉、切片停顿等) 

处理方法:使用规范的操作动作,保证均匀用力,保证切片动作连续。

3蜡块过软

处理方法:延长蜡块冷冻时间。

 

切片不完整

1切片中间密布小孔:常见原因为组织包埋时包埋盒底部存有小气泡或小水珠。 

处理方法:较厚组织可以进一步修切到组织最大面,以保证切片完整。

2切片中间出现空圈:常见原因为组织未脱水完全,自然风干后组织向内凹陷;组织块修切后未及时封蜡,存放一段时间后组织面向内凹陷。 

处理方法:较厚组织可以进一步深切,较薄组织则需要溶解后重新包埋切片。

 

切片跳片

1刀片没有固定紧

处理方法:①检查刀片,清除刀背的残蜡或其他污物;②进一步拧紧固定刀片的螺丝;③如刀片是靠弹性钢片着力的,则检查钢片弹性是否减弱,可将弹片往外轻微扳动,或直接钢片。

 

2组织块没有完全固定牢固

可能的原因切片刀刀台或组织块夹头的螺丝没有完全拧紧。

处理方法:拧紧刀台和组织块夹头的螺丝。

 

3组织块过硬

可能的原因:组织浸蜡、包埋的时间过长,或石蜡的熔点过高;组织块冷冻时间过长。 

处理方法:①减少组织块冷冻时间;②切片时可以先将毛巾用漂片水浸湿后,适当热敷于包埋组织表面,或者采用“哈气”的方法处理组织面③对于肌瘤等富含纤维的致密组织,修切组织块后,可将组织面浸于醋酸溶液(5%)中软化15-30 min,然后再切片;④质地坚韧的组织(如骨组织、肌肉组织等),可将组织包埋蜡块熔化,按脱水、透明的处理程序反方向处理至75 %乙醇,然后取出组织,流水冲洗后放入软化剂中处理 3-4 h(据组织的厚薄调整时间,一般以镊子夹起组织较柔软为宜)。组织软化后经流水冲洗3-4 h,按常规方法制作蜡块后,再行切片。

病理组织石蜡切片制作常见问题解析图4

切片被压缩或起皱褶

1石蜡不纯或疏松有气泡

处理方法: 选择质量较好的石蜡,并在熔蜡过程中避免气泡形成。

2皮肤、子宫内膜带肌肉和消化道黏膜带肌肉等特殊组织

处理方法:切片时可将组织质地较硬的部分朝上,如皮肤组织表皮、子宫内膜带肌组织和消化道黏膜带肌组织的肌层朝上。

3组织浸蜡和包埋用的石蜡硬度不一致

处理方法:检查和更换石蜡。

 

切片有刀痕或纵裂纹

1组织块中有钙化或脱钙不全

处理方法:可补充脱钙(5 %盐酸溶液)20-30 min

2刀口上沾有杂物

处理方法:切完1个组织块以后,使用毛笔清除刀口污物(由下至上)。

3组织块中有异物(如缝线、吻合钉等)

处理方法:①可以直接拔出者,可用镊子直接拔出即可;②如不便直接拔出,可按较硬难切组织处理方法处理,但需在软化流水冲洗后,拔出异物。

 

切片撕裂、散碎、不成片

1常见原因

①组织取材厚度过厚;②组织处理步骤处理不当;③脱脂不彻底,组织含脂肪过多。

2处理方法

①组织取材一般为2 mm;②不同的组织采取相应的固定、脱水、透明和浸蜡的操作步骤和时间;③可将组织块放在空气中自然风干 1~2 d 后再切片; ④把锯条或刀片一端放在酒精灯上1 cm 处加热5 s 左右(刀片温度达80℃左右即可),然后将刀片紧贴组织面,可见小气泡溢出,反复几次至气泡完全消失后,再用石蜡将组织块修补好;⑤将组织块于-20 ℃冰箱内冷冻10-20 min,取出后快速切片,并切切片直接放于浸水的载玻片上展片,不经温水漂片。

 

切片离刀,粘在石蜡块上

1石蜡过软

处理方法:将组织块适当冷冻一段时间。

2面上缘的蜡边太少

处理方法:使用毛笔在组织块原位展片,展开后然后再进行其他;若切片仍不能被展开,新包埋组织。

病理组织石蜡切片制作常见问题解析图5

标签:病理 组织 切片 问题 解析
本帖最后由 涣涣 于 2016-01-29 16:50:52 编辑
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风行水上,涣。
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蝴蝶兰dali2003 离线

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1 楼    发表于2016-03-09 22:31:28举报|引用
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 很好很好。谢谢分享!

我建议我们科技术组全体认真学习学习。

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相逢是首歌,同行是你和我。
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