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巴氏染色的液基细胞学片子时间久了有褪色,想重新复染,但总达不到最佳的效果,主要问题表现在核的细微结构表达不如以前清晰,比如图片为胸水的液基制片褪色后复染,很纠结那些红不红蓝不蓝的核。
求高手指点步骤中那个环节需要改进,或者提供方案。先谢谢大家了!
我用的脱色步骤是:
----------------脱色------------------
1.旧片子泡二甲苯,直到去掉盖玻片和胶。
2.片子再泡新的二甲苯,3天。
3.过三缸无水乙醇,每缸一天。
4.1%盐酸酒精缸泡30min,脱核色。(1%盐酸酒精=99ml无水乙醇+1ml浓盐酸)
5.放入流水盒子里泡20min,脱浆色。
6.放入无水乙醇待用。
7.片子放在染色板上,不扣制片仓,不能让片子全干要保持水分。(每次2-4张操作)
------------------重染------------------
8.缓冲液(加到细胞圈内)2次 —— 苏木素1次,5s ——缓冲液2次,冲干净 —— 无水乙醇3次,冲干净 ——伊红1次,80s ——无水乙醇冲干净——放入无水乙醇缸,1min——二甲苯,5min以上——封片
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