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乳腺癌FISH检测细胞消化后自溶

时光漏qiu 离线

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楼主 发表于 2014-04-16 16:25|举报|关注(1)
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 我们最近在乳腺癌fish检测实验中发现,胃蛋白酶(4mg/ml)消化15分钟,泡蒸馏水3分钟,染DAPI后观察细胞消化状态,发现细胞消化状态良好,ssc洗5min后梯度酒精脱水后接着往下做,第二天DAPI复染后,放4°C冰箱过6个小时后镜下观察发现,之前是散在的细胞部分黏连在一块,形态也发生改变。这是什么原因呢?难道是受残留的蛋白酶影响?

标签:乳腺癌 细胞 消化
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寻找生命的奇迹 离线

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1 楼    发表于2014-04-26 21:03:09举报|引用
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 不是酶的问题,可能是你盖盖玻片的时候划到组织。酶消化前你是如何处理的,高压高温煮片?信号点模糊么?

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狭路相逢,勇者胜

江辉辉 离线

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2 楼    发表于2014-06-10 21:38:33举报|引用
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排除操作影响,两个原因可能产生你这种现象,一个是组织变性和过夜杂交有过消化的作用(有文献说到,过高的变性温度等原因会导致细胞核变烂),另一个是标本做好后,放置时间太长,核也可能变淡变糊。前面一种情况,可降低前处理解决,将核消化到一个接近ok的状态较好,可以通过降低煮片修复时间(不知道你的煮片方式及时间)或消化时间(你的消化时间偏长)。后面的情况可以做好后-20℃放置半个小时后观察为好。

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梵净2010
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受苦的人没有悲观的权利

medman_2010 离线

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3 楼    发表于2014-08-02 20:49:24举报|引用
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1. 胃酶的一般活力较弱,不会引起细胞消化过度

2.胃酶最好选Sigma P6887或P7125 ,浓度也不需要那么大,如果用这两种酶,是不要染DAPI看的,一般组织四十分钟都没问题了,我们做乳腺,肺,软组织,胃都没问题

3. FISH是整个过程,你可以把你的流程贴出来看看,哪里有问题

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蓝宝石6628 离线

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4 楼    发表于2014-08-02 20:51:02举报|引用
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