我们最近在乳腺癌fish检测实验中发现，胃蛋白酶（4mg/ml）消化15分钟，泡蒸馏水3分钟，染DAPI后观察细胞消化状态，发现细胞消化状态良好，ssc洗5min后梯度酒精脱水后接着往下做，第二天DAPI复染后，放4°C冰箱过6个小时后镜下观察发现，之前是散在的细胞部分黏连在一块，形态也发生改变。这是什么原因呢？难道是受残留的蛋白酶影响？

1. 胃酶的一般活力较弱，不会引起细胞消化过度

2.胃酶最好选Sigma P6887或P7125 ,浓度也不需要那么大，如果用这两种酶，是不要染DAPI看的，一般组织四十分钟都没问题了，我们做乳腺，肺，软组织，胃都没问题

3. FISH是整个过程，你可以把你的流程贴出来看看，哪里有问题

排除操作影响，两个原因可能产生你这种现象，一个是组织变性和过夜杂交有过消化的作用（有文献说到，过高的变性温度等原因会导致细胞核变烂），另一个是标本做好后，放置时间太长，核也可能变淡变糊。前面一种情况，可降低前处理解决，将核消化到一个接近ok的状态较好，可以通过降低煮片修复时间（不知道你的煮片方式及时间）或消化时间（你的消化时间偏长）。后面的情况可以做好后-20℃放置半个小时后观察为好。

 不是酶的问题，可能是你盖盖玻片的时候划到组织。酶消化前你是如何处理的，高压高温煮片？信号点模糊么？