我们经常说冰冻切片组织不能用水冲，否则会引起冰晶。包埋剂如胶水，含有水份，所以也会引起冰晶，这样的理论对不对？

我今天特意买了一个猪肾、一块猪肝，取材取好后，分别用立即冷冻、取好后浸在水里十分钟后拿出再冷冻二种方法，然后分别采用OCT包埋和胶水包埋，结果显微镜下用肉眼看不出什么区别。

而且用胶水切的片要比OCT的平整，因为OCT的质地比较韧，容易出现切片上有横纹；OCT的收缩度往往比组织的大，切片上组织的面积往往大于OCT的外圈，因此在粘片时经常会有皱折。而胶水包埋的切片就非常平整。

所以，就这些问题我希望大家能够回去做一下，讨论一下，看看问题的真实现象是什么。

上图是用胶水做包埋剂切的片子：

 在水中浸了十分钟后的肝组织，冰晶并不明显，但细胞好象有点水肿变性。

 这是二块组织冷冻速度慢引起的冰晶。

我个人觉得组织本身都带有一定的水分，岂不是本身冰冻后就都会有冰晶产生？我觉得不是。当水分大量浸透组织后。使组织明显肿胀、水肿，这时候冰冻后的组织才会有冰晶产生。有时候，我们冰剩后的组织固定了半个小时以内还拿来做冰冻，冰晶的现象都不是很明显（当然，其中我们会做一些小处理）。个人觉得：胶水和OCT最明显的一点区别可能是细胞大小的差别，胶水包埋染出来的细胞形状感觉要小点，不过胶水包埋的组织更好切，胶水本身又很经济适用，所以我们一直用胶水。

我们一直都是用OCT，明天就去买一瓶胶水来试一下。另外，有时标本己经放在固定液里了，但是临床要求做冰冻（这种情况多见于手术室来了新手，不知道冰冻切片标本无须固定的那个时段），我们就先把标本捞出来，用干纱布吸水后再取材，片子切出来感觉冰晶也不太多。遇到这种标本，众网友是如何处理的？

如果是这样，可能你做的都有冰晶，只是你不认识，一直认为正常应该就是这样。

 用纱布吸干水份，可以加快冷冻速度，是一个非常好的办法。

谢谢老师的指点，以后要多学习，不能瞎说，以免遭笑

学习不会遭人笑的，我也经常会说这样的问题，也会说错话。说错了有什么关系，只有错才会进步。说比不说要好，最起码你说了会有新的认识。而不说的，可能永远不知道是对还是错。

我们也是一直都用胶水，但是值得提醒大家的是：胶水有的很浓有的很稀，要注意选择合适的才可以做出较好的切片。

关于冰晶问题我做过不少对照实验，我发现细胞内冰晶对切片影响最大，但冰晶的形成似乎与标本是否浸水联系不多，最关键的问题是冷冻的速度。也就是说，冷冻速度太慢是形成冰晶的主要原因！

 冰晶的形成主要是温度停留在零下12-16度的时间太长，故无论用什么方法，用何种包埋剂，只需要跳过这个温度差，产生的冰晶就少。

因为水的热容大，为4.2*10 3 ，相对于细胞外骨架、内骨架 及细胞膜而已大的多，故先用吸水纸吸水的目的是让组织更快的达到-16以下。

对于泡在水中太久，细胞因环境离子浓度差，导致细胞内水分多，故相对冷却时间增加，停留在冰晶形成区域温度的时间就长，故更容易形成冰晶。这也是为什么含水多的组织难做冰冻的原因。

另外冰晶形成还有一个不容易注意的细节：展片后没有及时的放入固定液中，尤其在热的南方更是如此，我已做相关对比试验。同组织同方法切片，1s 2s 3s 4s 5s 6s 7s 8s 15s 30s 1m  后放入固定液中，1-3s不会出现冰晶，5s之后可能出现， 时间越长含细胞内水越多的组织越明显（以上结论的论文将近期发表）。 同时 ，离子型固定液在同种情况下更容易形成冰晶，故 设计固定液成分时尽量避免离子产生，建议使用苦味酸-丙酮-甲醛 混合固定液。

 另外，使用改良快速石蜡技术，可以使石蜡切片时间控制在25-30分钟，已经能达到快速诊断的要求，而且细胞形态远比冰冻切片好，价格便宜，为什么不用快速石蜡呢？