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求助-关于免疫组化组织碱修复出现褶皱的问题

呼延雪青 离线

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楼主 发表于 2011-12-16 14:52|举报|关注(0)
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求助-关于免疫组化组织碱修复出现褶皱的问题图1
名称:扁桃体组织、Bcl-6 EDTA修复
描述:Bcl-6 EDTA修复.png
求助-关于免疫组化组织碱修复出现褶皱的问题图2
名称:扁桃体组织、Bcl-6 柠檬酸修复
描述:Bcl-6 柠檬酸修复.png
求助-关于免疫组化组织碱修复出现褶皱的问题图3
名称:图1
描述:MUM1;EDTA修复-扁桃体.png
求助-关于免疫组化组织碱修复出现褶皱的问题图4
名称:图2
描述:MUM1;柠檬酸修复-扁桃体.png
 
我最近做免疫组化的实验,出现这种情况,如上图。
玻片是用多聚赖氨酸涂制的,操作流程如下:
1.蜡块组织切片、片厚3微米。脱蜡水化后抗原修复,采用高温高压修复法。
2.修复之后进行过氧化氢封闭,10min。
3.一抗,30min。pbs冲洗。
4.二抗两步法,各十分钟,每步结束后均用pbs冲洗。
5.染色3min,染色结束后置于蒸馏水中终止反应,置苏木素复染3min。
6.95%乙醇,无水乙醇各2min,吹干。
7.二甲苯透明,三次各5min,中性树脂封片。
镜下看到EDTA修复出的片子有褶皱,柠檬酸的片子却没有,不知为何?其他的扁桃体的EDTA修复也有类似现象。
标签:免疫组化 褶皱 组织修复
本帖最后由 呼延雪青 于 2011-12-27 10:03:51 编辑
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yang 离线

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4 楼    发表于2012-01-01 00:44:24举报|引用
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个人意见,这些褶皱和展片没有直接关联性,是热修复造成的,在EDTA高压修复是细胞丰富的组织中常见,这些褶皱我更考虑是因为组织切片在热的作用下其膨胀系数同玻片不一而导致的,所以在细胞约丰富的区域往往越明显,当然pH值也是影响条件之一。

建议细胞密集的组织:如淋巴结、扁桃体、胸腺,要用EDTA修复时你可以尝试一下接近100度的煮沸方式,而不建议高压。

脱蜡、粘附未见异常。

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呼延雪青
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xkj2797xkj 离线

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3 楼    发表于2011-12-27 21:17:51举报|引用
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我说说我的见解,从低背景看来,是有点要掉片的感觉,但是有没有掉,展片形成的皱褶有可能,但是可能性小,在EDTA处理过程中,皱褶那么多会掉片的。看看组织前期处理、还有染色过程中冲洗、抗原修复等一系列原因!

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(本观点纯属本人意见!仅供参考!本人微信:13759416387)

寻找生命的奇迹 离线

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2 楼    发表于2011-12-27 20:47:13举报|引用
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仔细看,几张都有褶皱,不过柠檬酸修复褶皱少一点。

可能出现的原因:

1、切片在漂烘仪水面没有完全展平,与载玻片粘附不牢,形成波浪状起伏

2、脱蜡有点不彻底

而柠檬酸及EDTA修复液PH不同可能造成一定的影响

我个人感觉Bcl-6、MUM-1、BAX、CD10、CD15、CD21、CD30、CD117、TS、TTF-1等这些抗体用EDTA修复液效果会更好一些

 

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狭路相逢,勇者胜

冰洋 离线

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1 楼    发表于2011-12-25 16:25:03举报|引用
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请发贴至病理技术;免疫组化栏里,看到的人会多一些

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呼延雪青
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