求助：有人做过肿瘤组织NGAL的反转录PCR吗？

我在实验中遇到了点问题，我选的NGAL引物是130BP，跑出来的电泳在100BP一下，而且出现拖尾，怀疑是引物二聚体。问题一：是因为我的PCR 条件不对吗？顺便说下，我做的退火条件是50度。

文献中没有条件，现在才在摸。听老师说退火温度是Tm 值减去5，我按照Tm=2(A+T)+4(C+G)，是56，那么我是不是应该按退火温度为51，再做一次？另外，我还应该注意什么？非常感谢！！

 其实所有RT-PCR的原理是一样的。

首先保证RNA的质量（这个很重要），可走一个胶

RT按试剂盒一般没问题

PCR的引物你就用PRIMER 5一般没问题，

你说你的primer长度130bp是不是写错了，一般20-30左右吧，

我觉得你先做一个内参（GAPDH）看它是否扩增出来，检测一下你的系统是否工作，再分析这次不成功的原因