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各位老师:
学生最近做IHC 可重复好多次都染不上色
说说我的过程吧 :烤片2小时 二甲苯 15分钟 各两次脱蜡 100% 95% 85% 75%梯度酒精 水化。蒸馏水冲洗2次;PBS洗3次/5min;高温高压修复10分钟;PBS洗5次/5min;3%H2O2封闭15分钟;PBS洗5次/5min;一抗4度过夜;取出孵育的一抗 ,室温30分钟;PBS洗5次/5min;滴加二抗增强剂A(北京中杉二抗试剂盒)37度水浴30分钟;PBS洗5次/5min;滴加二抗B,氺浴30分钟;PBS洗5次/5min;滴加DAB,镜下观察;蒸馏水冲洗,苏木素复染,1%盐酸酒精分化,自来水返蓝;梯度酒精 二甲苯透明,中性树胶封片。
结果:组织没一点染色 就是组织原色 重复好多次 但还是这样的结果 同样的标本 别人做不同指标就能做出来啊 只是抗体不一样而已!!