楼主 发表于 2009-11-25 13:48|举报|关注(0)

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刚开展免疫组化，最近试做几次，染色都失败了，跟HE染色切片一样，根本不上色！把您免疫组化操作的详细过程给我传一下！谢谢！试剂和高压锅都是新买的，我的染色过程：石蜡切片3微米，放60度烤箱过夜-脱蜡-水化-pbs三次每次三分钟-高温修复（切片在小染色缸，内为柠檬酸修复液，高压锅放自来水高压锅盖冒气两分钟）-冷却20分钟-H2O2、3%十分钟-pbs冲洗三次-加抗体-45分钟温箱-pbs冲洗三次-加鼠兔IgG-15分钟-pbs=三次-显色剂9分钟-自来水冲洗-苏木素染色-盐酸酒精-氨水-酒精脱水-二甲苯-封片！

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1 楼    发表于2009-11-25 17:32:00举报|引用

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 过程基本没问题，我们用EDTA修复，水浴99度。没沸腾过程，因此很少脱片。如果你找不到原因，建议去别的实地单位考察一下。

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嫁人就嫁灰太狼，学习要上华夏网。

2 楼    发表于2009-12-01 09:35:00举报|引用

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 切片在小染色缸，内为柠檬酸修复液，高压锅放自来水高压锅盖冒气两分钟,染色缸是塑料的？

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3 楼    发表于2009-12-03 16:18:00举报|引用

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你的问题可能出现在以下方面：

提高抗体抗体浓度过低，提高抗体浓度，

孵育时间过短，孵育时间不要少于60分钟；

试剂超过有效使用期：及时更换试剂试剂；
滴加操作中，滴加试剂前缓冲液未甩干，致使试剂稀释：每步滴加试剂前甩干切片中多余的缓冲液
（但防止切片干燥）；
蛋白封闭过度：封闭时间不要超过10分钟；

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