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染色失败,请您指教!

芳芸 离线

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楼主 发表于 2009-11-25 13:48|举报|关注(0)
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刚开展免疫组化,最近试做几次,染色都失败了,跟HE染色切片一样,根本不上色!把您免疫组化操作的详细过程给我传一下!谢谢!试剂和高压锅都是新买的,我的染色过程:石蜡切片3微米,放60度烤箱过夜-脱蜡-水化-pbs三次每次三分钟-高温修复(切片在小染色缸,内为柠檬酸修复液,高压锅放自来水高压锅盖冒气两分钟)-冷却20分钟-H2O2、3%十分钟-pbs冲洗三次-加抗体-45分钟温箱-pbs冲洗三次-加鼠兔IgG-15分钟-pbs=三次-显色剂9分钟-自来水冲洗-苏木素染色-盐酸酒精-氨水-酒精脱水-二甲苯-封片!
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wfbjwt 离线

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1 楼    发表于2009-11-25 17:32:00举报|引用
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 过程基本没问题,我们用EDTA修复,水浴99度。没沸腾过程,因此很少脱片。如果你找不到原因,建议去别的实地单位考察一下。
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嫁人就嫁灰太狼,学习要上华夏网。

yang 离线

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2 楼    发表于2009-12-01 09:35:00举报|引用
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 切片在小染色缸,内为柠檬酸修复液,高压锅放自来水高压锅盖冒气两分钟,染色缸是塑料的?

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promotion 离线

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3 楼    发表于2009-12-03 16:18:00举报|引用
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你的问题可能出现在以下方面:

提高抗体抗体浓度过低,提高抗体浓度,

孵育时间过短,孵育时间不要少于60分钟;

试剂超过有效使用期:及时更换试剂试剂;
滴加操作中,滴加试剂前缓冲液未甩干,致使试剂稀释:每步滴加试剂前甩干切片中多余的缓冲液
(但防止切片干燥);
蛋白封闭过度:封闭时间不要超过10分钟;

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