替一位朋友提问：如何在血液中提取中性粒细胞？！

急请老师和朋友们回复,指点，非常感谢！

 取新鲜抗凝血10ml，与10ml Hank's混匀，小心加到10-15ml细胞分离液之液面上，800转/分20-25分钟，分离3层；第一层，血浆或组织匀浆液层；中间层：白细胞层；第三层：红细胞层。留取第一层待用。手机中间层细胞，加入1倍以上的PBS或Hank's混匀，2500转/分离心30分钟，弃上清，留沉淀。在沉淀中加入留取的第一层匀浆层细胞，混匀。

再用淋巴细胞分离液提取分离粒细胞：编号LTS1077

取上述混合后液体小心加在加入液体量一半量的淋巴细胞分离液上，1500转/分15分钟，分四层；第一层，血浆层；第二层，淋巴细胞层；第三层，透明分离液；第四层：红细胞和粒细胞层。收集第三层和四层细胞，加入适量Hank's混匀，2000-2500转/分离心20-25分钟；再用同样洗涤液洗涤细胞2次，以洗去残留的淋巴细胞分离液。再用细胞培养液将细胞调配成适当浓度。

上面是朋友发过来的操作步骤，问题是：检出率很低，粒细胞只有6%。