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从自信到自以为是,我的一个错误

dingwei 离线

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楼主 发表于 2008-12-31 22:04|举报|关注(13)
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2007年,一个偶然的机会,我发现有家医院的免疫组化结果:Ki-67,P53,ER、PR等阳性细胞数有点少,大概只有30-40%,如果是一二例,结果应该没问题,然而一年以来都是这样,而CK、EMA、CD20、CD79a、CD45,CD45ORO等浆与膜表达的标记很好,感觉告诉我那里出问题了。他的操作过程是:
1、脱蜡至水
2、甲醇双氧水阻断。
3、蒸馏水洗
4、用电磁炉最大档或中档加热,因处理片子不多,在高压锅里放上蒸馏水,里面放一500ml烧杯,烧杯里放300ml 柠檬酸ph6. 0抗原修复液,把片子放在烧杯里。加热戴帽出气后3分钟,关闭电磁炉。
5、自来水冲高压锅快速冷却,打开高压锅盖,用冷水慢慢冲入高压锅内至冷。
6、蒸馏水洗
7、缓冲液洗三道
8、加一抗(37℃孵育60分钟)
9、蒸馏水洗,缓冲液洗三道
10、加检测系统(37℃孵育30分钟)
11、蒸馏水洗,缓冲液洗三道
12、DAB显色。
问题出在那呢?那只有一条一条去排除。
一、碰到这样的情况我本应该首先考虑是不是一抗出问题了,但他们用了一年,一抗换了几次了,所以我想是不是组织处理导致其些抗原丢失了。所以,让他切了几张片子,我拿回自己科室做了一下,发现阳性率在80-90%左右,也就是说组织是没有问题的。
二、要考虑一抗是不是有问题,如果是原液,应该考虑稀释比对不对,如果是即用型,应该考虑有效期、厂家有没有配正确、运输过程中有没有出现意外等。用其的一抗与我们的检测系统配合,实验结果阳性很好,一抗没有问题。
三、考虑检测系统有没有问题,不同的检测系统,敏感度不同,相对应的一抗浓度也不相同,要考虑检测系统与一抗浓度是否相配,同时也要考虑质量有没有问题。用其的检测系统与我们的一抗相配,与他自己的一抗相配,实验结果阳性也很好,检测系统没有问题。
四、抗原修复有没有问题?抗原修复液是否有效?pH值是否正确?高压锅有没有问题?结果都没有问题。
五、缓冲液是否有问题?是否因为蒸馏水pH值不对?结果都没问题。
六、DAB有没有问题?结果没有。
七、技术员操作有问题?我亲自到他们科室去做,结果和他做的一样,回到我科室又好了。
    能想的问题都想到了,那还有什么我们没有想到的呢?
    唯一区别的只有加热工具了,我们用电炉加热,他们用电磁炉,从理论上说,不管什么样的加热工具,只要能达到温度,高压锅出气戴帽后,里面的温度是恒定的。抗原修复应该与温度与时间相关。抱着试一下的心态用让他用电炉试了一下,没想到问题出现了。
    是电磁炉的原因,我很兴奋,终于解决了,是什么原因呢?我特意买了只电磁炉,从400W开始到2100W,每一档都用了二十几个抗体做了实验,并与电炉作比较:发现凡膜与浆的抗体基本没有差异,而核抗原随着电磁炉的功率的增加,阳性细胞数减少,阳性强度降低。我重复了十几次,结果都是一致的,问另一个用电磁炉修复的医院,方法也和前面医院的相同,结果也一样,换了电炉后问题也就解决了。
我相信自己已经找到问题的所在,是电磁炉的原故,那什么原因呢?为什么只出现在抗里呢?我上网查了一下,发现有十几万篇有关电磁波对DNA损伤的论文,是不是电磁波破坏了DNA,从而损伤了抗体的活性呢?如果是这样,那就解释得通为什么功率越大,阳性细胞越少。于是,我写了篇文章,有关电磁炉对抗免疫组化的影响,但有些大医院的技术员说他们也用电磁炉,没有发现这种现象。我充分相信自己的结论,因为这是一年以来用电磁炉后存在的现象,自己做了十几遍重复性在100%。总认为他们肯定没有做过与电炉的对照,而且,电磁炉对核抗原的影响只是细胞的减少,并不是完全没有,具有欺骗性,他们没有发现而以。一年来,我总是相信自己的结论,对别人的意见不予理睬,因为没有人告诉我他们做过对照。
然而,多次与梁英杰老师交流,他说他们曾做过实验,电磁炉与微波炉比较,电磁炉比微波炉强,想起一年来别人的不同意见,这让我对我的实验产生了怀疑。中华病理杂志的霍临明老师告诉我实验要严谨,让我彻底冷静下来。那问题到底出在那呢?

    经过一天二夜的冥思苦想,我终于想到了自己实验出现这种结果的原因,是一个从来都认为不可能有区别的地方。通过反复实验,证明这种想法是正确的。

就是高压锅里再用烧杯的原因,由于电磁炉加热太快,烧杯内的温度与高压锅内的液体温度不能同步,导致必须使用高温修复的抗原修复时间不够,功率越大,加热速度越快,切片修复的时间也越短,抗原暴露也越差,而用电炉加热较慢,有足够的时间让杯里的水温升高,也就没有这种情况。所以电磁炉抗原修复应该直接将缓冲液放入高压锅内,而且结果与功率无关。一种巧合,正好这些需要高温修复的抗原大多是核抗原,让我误认为电磁波对核抗原有影响,而国外对电磁波对人的影响很重视,电磁波的确对活体的DNA损伤很严重,而且我的实验结果又很稳定,所以我一直坚持自己的错误观点。

我以前一直认为抗原高温修复主要是高压出气后的三分钟,我做过测试,高压出气后1分钟,拿去帽子,测了一下里面烧杯的温度,和锅内的是一致的,所以说,从升温到戴帽这段时间也很重要,保证高压下一致温度3分钟也但重要,只有保证一定的时间后,抗原才能暴露,具体差异在那?时间要多长?我也说不清。用电炉,直接与间接结果是一样的;用电磁炉,最低功率时,直接与间接结果也差不多。以后注意一下直接与间接相同总共需要多少时间。

具体问题的关键应该是在烧杯中的温度是否能保证在3分钟内保持120度。
    为什么一年多来,面对别人的不同意见我会如此自以为是,总认为自己是对的,如果早一点重视,一个错误的观点也不会坚持了一年多。这是过于自信了,这就象很多的技术员总觉得自己做的不错,自己做的就是正确的,对别人的意见听不进,特别是有大医院的和有点年纪的,就象我。
虚心使人进步,骄傲使人落后,重视别人不同意见,接受别人的看法,才能使自己少走弯路,才能使自己不断进步,这需要勇气和智慧。
我把这句话作为新年祝词,与朋友们共勉。

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本帖最后由 dingwei 于 2012-07-12 08:03:25 编辑
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本人观点纯属个人偏见,希望大家独立判断,正确引用!中华病理技术网:http://www.zhbljs.com/
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洋溢 离线

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71 楼    发表于2018-01-03 14:47:35举报|引用
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 学习了,老师的敬业精神,敬佩!

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乔文英 离线

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70 楼    发表于2017-11-06 21:36:57举报|引用
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谢谢丁老师的无私!
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guoshan 离线

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69 楼    发表于2017-06-28 10:37:08举报|引用
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 拜读

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rop76@163.com 离线

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68 楼    发表于2017-02-24 11:22:28举报|引用
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 佩服佩服,深深受教了。

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bach 离线

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67 楼    发表于2012-09-12 10:21:19举报|引用
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丁老师是个认真的人,向您学习!

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细胞学新手,我知道的还很少,需要努力学习

养生主 离线

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66 楼    发表于2012-07-05 22:01:41举报|引用
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我们以前也是高压锅里放烧杯,真心假阴性啊!现在是直接放高压锅煮,效果很好

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llj19971997 离线

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65 楼    发表于2012-03-25 18:22:59举报|引用
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这个帖子,真棒。学习了!

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王花咪 离线

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64 楼    发表于2012-03-13 20:33:05举报|引用
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我是新手,上个去上级学了一个月的免疫组化,感觉上级医院做出来片子相当的漂亮。回到自己科里很是惶恐,不知道按照一样的程续自己是否能做出同样漂亮的片子来。因为电炉实在质量太差,所以决定还是用电磁炉,今天看到这往篇文章,吓坏了,不能用电磁炉,那我怎么办?为了用电磁炉还特意买了一个不锈钢的高压锅,还好看到后来还是可以用的,呵呵!

我不知道自己说的对不对,请各位老师指证。我是将搪瓷杯盛柠檬酸修复液,高压锅内装自来水,隔水加热至沸腾再将脱蜡至水的片子放入,冒气后加热5分钟,脱离热源自然走气,室温下冷却20分钟。

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xxmcyuan 离线

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63 楼    发表于2012-03-08 08:47:37举报|引用
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钝刀 离线

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62 楼    发表于2012-03-05 22:40:58举报|引用
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好技术员是诊断医生的福音!可惜现在的诊断医生看不到这点!他们认为技术员就是做片子的,大街上随便拉个人都可以胜任的,跟学不学医没关系,也就是说没有技术含金量。丁老师好样的,赞一个!

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新学生 离线

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61 楼    发表于2012-01-10 22:22:04举报|引用
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我们在高压锅内用塑料染色缸。

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liu562 离线

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60 楼    发表于2012-01-03 16:52:32举报|引用
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用不锈钢的杯子加热快些是不是好些?

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张椽 离线

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13 楼    发表于2011-05-27 15:11:00举报|引用
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 丁老师是我们学习的好榜样
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学习、学习、再学习

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14 楼    发表于2011-05-24 20:12:00举报|引用
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 谢谢
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amy 离线

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15 楼    发表于2011-04-21 12:00:00举报|引用
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 能把自己的体会和经验写出来,让大家学习,实在是太感谢了,向丁老师致敬。
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weidongzuo 离线

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16 楼    发表于2011-04-21 10:54:00举报|引用
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雨巷 离线

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17 楼    发表于2011-04-15 21:51:00举报|引用
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 谢谢丁老师,学习了
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白日梦 离线

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18 楼    发表于2011-04-15 12:19:00举报|引用
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 电磁炉那微乎其微的辐射在短短数分钟内就能对DNA产生作用,那太可怕啦,人都不能靠近了。所以,从这角度上想想似乎不可能的事。
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yanzhaoxia 离线

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19 楼    发表于2011-03-31 13:18:00举报|引用
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 peifu
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新建 离线

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20 楼    发表于2010-11-11 21:53:00举报|引用
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 很钦佩丁老师!向您学习!
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