转贴北京友谊医院病理科  周小鸽主任的

第九次免疫组织化学质量控制存在的问题、原因分析和建议

单位编号：8
得分：CgA（5分）
问题：无信号
原因：从染色方法上看没有问题。出现无信号的原因有以下几种可能：1、试剂失效（可能是一抗。但不会是二抗和DAB，因为其它三种抗体都染出来了）；2、染色过程某一或某些步骤遗漏。
建议： 用已知的阳性对照片（如结肠粘膜）再染一次，并严格记录每一步操作（避免遗漏）。

单位编号：11
得分：S-100（6分）
问题：一片黄，神经确实染上了，但是其它几乎所有组织都染得很黄，影响判断。
原因：可能与采用热修复的方法有关。
建议：对S-100染色最好采用蛋白酶（胰酶）消化，取代微波加热。如果采用热修复，一般要稀释一抗，最佳稀释度要自己摸索。

单位编号：17
得分：S-100（11分）
问题：虽然结肠和肝脏中的神经纤维染色清晰，但脑组织和神经鞘瘤两种组织染色不明确，难以判断阳性或阴性。
原因：可能与采用热修复的方法有关，98度可能温度不够。
建议：对S-100染色最好采用蛋白酶（胰酶）消化，取代微波加热。如果采用热修复，温度最好达到100度，并且稀释一抗，最佳稀释度要自己摸索。


单位编号：19
得分：CgA（12分）
问题：无信号
原因：可能与未进行热修复有关。目前几乎所有抗体都要进行抗原修复才能获得有效染色。
建议：CgA抗原检测采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。100度20分钟。

单位编号：25
得分：S-100（11分）
问题：虽然结肠和肝脏中的神经纤维染色清晰，但脑组织和神经鞘瘤两种组织染色不明确，难以判断阳性或阴性。
原因：可能与采用热修复的方法有关，也可能与未对内源性生物素进行封闭有关
建议：对S-100染色最好采用蛋白酶（胰酶）消化，取代微波加热。如果采用热修复，一般要稀释一抗，最佳稀释度要自己摸索。


单位编号：35
得分：CD56（5分）
问题：无信号，边缘效应
原因：CD56无信号可能与一抗失效有关，也可能与漏掉某一染色步骤有关，还可能与修复强度不够（你们用的柠檬酸盐pH6.0）和一抗孵育时间较短（你们用了30分钟）有关。
建议：找一张神经组织切片，重新做一遍，不要遗漏每一步，同时改用碱性修复液（EDTA pH8.0或EGTA pH9.0），并把一抗孵育时间延长到1小时。

单位编号：37
得分：S-100（11分）
问题：脑组织和神经鞘瘤两种组织染色不明确，难以判断阳性或阴性。
原因：抗原修复过渡，你们采用了胰酶消化加热修复。
建议：对S-100染色仅采用胰酶消化即可。

单位编号：40
得分：S-100（6分）
问题：一片黄
原因：修复过度，高压锅喷气后2.5分钟对S－100抗原太强了。
建议：对S-100染色最好采用蛋白酶（胰酶）消化，取代微波加热。如果采用热修复，一般要稀释一抗，最佳稀释度要自己摸索。

单位编号：41
得分：S-100（12分）
问题：脑组织和神经鞘瘤两种组织染色不明确，难以判断阳性或阴性。
原因：染色方法中有2个问题。第1：一抗孵育120分钟太长；第2：未对抗原进行修复（消化或热修复）。
建议：对S-100染色利用消化酶消化，并将一抗孵育时间缩短到1小时。

单位编号：45
得分：Syn（11分）
问题：部分无信号，部分着色浅，结肠腺体中的内对照细胞没有着色。
原因：可能与采用胰酶消化有关，此法修复能力弱。
建议：对Syn染色采用热修复（微波炉、高压锅、水煮沸）的方法。

单位编号：46
得分：CD56（12分），S-100（6分）
问题：着色暗，过深，影响判断。
原因：一抗孵育时间120分钟，太长。
建议：将一抗孵育时间缩短到1小时。并且最好采用二步法检测系统。

单位编号：52
得分：CD56（12分）
问题：除脑组织有信号外，其余组织没有信号。并且肾脏有内源性生物素着色。
原因：内源性生物素着色与采用SP法染色没有封闭内源性生物素有关。CD56染色弱可能与柠檬酸盐pH6.0修复液较弱有关
建议：采用二步法进行检测或封闭内源性生物素。采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复

单位编号：54
得分：CgA（10分）
问题：一片黄
原因：从提供的方法中看不出明显问题。
建议：用阳性片再重新试一次。严格控制修复时间。

单位编号：55
得分：S-100（6分）
问题：一片黄
原因：高压锅修复造成的。
建议：对S-100染色最好采用蛋白酶（胰酶）消化，取代微波加热。如果采用热修复，一般要稀释一抗，最佳稀释度要自己摸索。


单位编号：59
得分：CD56（9分）
问题：无信号
原因：你们采用的高压锅7分钟修复，时间太长了。另外，一抗孵育时间30分钟，太短了。
建议：采用高压锅修复，时间最好控制在2分钟之内。一抗孵育时间延长到1小时。

单位编号：60
得分：CgA（10分）
问题：一片黄，并有内源性生物素暴露。
原因：出现一片黄，即着色过深，可能是一抗浓度太高。另外，没有封闭内源性生物素。
建议：稀释一抗数倍试试。对于内源性生物素应该进行封闭或用非生物素标记的二步法取代SP法。

单位编号：62
得分：Syn（8分）
问题：所有组织几乎无信号
原因：一抗120分钟，太长。胰酶加高压锅修复，太强。
建议：对Syn染色采用热修复（微波炉、高压锅、水煮沸）的方法，不再同时用胰酶消化。并将一抗孵育时间缩短成1小时。

单位编号：64
得分：CD56（11分）
问题：一片黄
原因：从提供方法中看不出明显问题。
建议：将一抗稀释数倍后用同样方法试试。另外，试试微波修复，沸腾后维持20分钟。

单位编号：65
得分：Syn（7分），CD56（9分），S-100（12分）
问题：信号太弱
原因：S-100可能与未对组织修复(胰酶消化)有关。Syn可能与采用胰酶消化有关。CD56信号弱可能与修复液为柠檬酸盐pH6.0有关，以及采用SP法在增强染色信号方面较弱有关。
建议：对S-100 采用胰酶消化。对Syn染色采用热修复（微波炉、高压锅、水煮沸）的方法。CD56采用二步法进行检测，采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。

单位编号：66
得分：CgA（12分），Syn（11分），CD56（10分），S-100（6分）
问题：全部一片黄
原因：从方法上看除了修复温度是98度而不是100度外，没有明显问题。
建议：用EliVision检测系统试试。

单位编号：67
得分：CgA（11分），Syn（7分），CD56（5分），S-100（5分）
问题：无信号
原因：4种抗体染色全无信号，很难理解4种一抗同时出问题。而更可能是某些共同的环节出了问题，如二抗，DAB等。从你们提供资料看，一抗有中杉的、迈新的，二抗是长岛的，DAB是北京化工厂的。因此，这些试剂是否匹配？另外，当时的DAB测试过肯定没有问题吗？
建议：用同一家公司的试剂为好。如果用不同公司的试剂，一定要事先进行测试。

单位编号：68
得分：S-100（6分）
问题：信号弱，背景黄
原因：一抗孵育时间太长（120分钟，37度）。
建议：缩短一抗孵育时间到1小时。可试试采用胰酶消化代替热修复。


单位编号：70
得分：CgA（未打分）
问题：组织多数被擦掉，剩余部分组织无信号。
原因：修复温度90度15分钟，温度太低，时间也短。
建议：让修复液沸腾后维持20分钟。

单位编号：71
得分：CgA（9分），S-100（8分）
问题：一片黄
原因：CgA 和S-100可能与一抗孵育时间过长（120分钟37度）有关。
建议：一抗常温下孵育60分钟。S-100染色时，采用胰酶消化。