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- 细胞学中细胞的应用价值
| 细胞学中细胞块的应用价值 The Utility Values of Cytoblocks in Cytology 实用医技杂志 刘福川 程继荣 王小兵 廖华 王钧 杨宏樱 杨志 摘 要：目的:通过大量应用细胞块技术检诊患者,探讨其临床应用价值.材料与方法:收集胸腹水、纤支镜灌洗液、尿液、针吸物洗涤液标本按细胞块技术操作规程进行细胞块制片、并设涂片自身对照.必要时行特染及免疫细胞化学检查.结果:胸腹水细胞块制作成功率65.94 %(453/687),细胞块切片较传统涂片的阳检率提高10倍.纤支镜灌洗液细胞块制作成功率为23.64 %(13/55),并对明确诊断有一定价值;尿液及实质肿块穿刺洗涤物制作细胞块成功率低且不能提高阳检率.结论:在标本量足够的情况下细胞块技术具有诊断准确性高的特点,但最适用于胸腹水标本. |
| 收稿日期：2004年3月2日 出版日期：2004年10月25日 |
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本帖最后由 于 2006-12-16 22:53:00 编辑
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367例胸腹腔积液细胞学检查和琼脂石蜡双重包埋切片对照分析
作者：智连艺 作者单位：中国医科大学附属四院病理科,辽宁 沈阳 110032
【关键词】 胸腹腔积液
1 资料与方法
收集我院2002～2004年胸腹腔积液检查367例病例，男性236例，女性131例，最小年龄24岁，最大年龄83岁，平均55.2岁，其中血性胸腹腔积液272例，非血性胸腹腔积液95例。对送检的胸腹腔积液，立即以2000转/分离心5分钟，取沉淀物做均匀涂片4张，及时用酒精乙醚固定液固定20～30分钟，HE染色，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，显微镜观察。剩余沉淀物以3000转/分，离心5～10分钟，用2.73％琼脂包埋，常规脱水做石蜡切片HE染色，显微镜观察。
2 结果
在367例胸腹腔积液中查到恶性肿瘤细胞223例，阳性率为60.8％，其中涂片检出134例，琼脂石蜡双重包埋切片检出223例，，男性125例，女性98例，最大年龄82岁，最小年龄27岁，平均50.6岁。223例阳性患者通过气管镜及手术后病理组织学所证实，明确了肿瘤细胞的来源和性质，原发肺癌137例（61.4％），肺转移54例（24.2％），恶性间皮瘤16例（7.2％），恶性淋巴瘤5例（2.2％），卵巢癌3例（1.3％），消化道恶性肿瘤6例（2.7％），来源不明2例（0.9％）。在223例阳性患者中腺癌164例（73.5％），鳞癌43例（19.3％），未分化癌9例（4.0％），其他7例（3.1％）。
3 讨论
在对367例胸腹腔积液做细胞学检查和琼脂石蜡双重包埋切片检查中，涂片检查出阳性134例（36.5％），琼脂石蜡双重包埋切片法查出阳性223例（60.8％），结果证明琼脂石蜡双重包埋切片法明显优于单纯涂片法检查。琼脂石蜡双重包埋切片法中细胞分布均匀，细胞形态完整，结构清晰 ，甚至可明显见到乳头状癌的砂粒体结构，易诊断，减少误诊机会。常规细胞涂片2～4张常无法满足诊断医生在诊断过程中提出加染免疫组织化学染色的要求，而石蜡切片法则可根据需要进行反复切片，以满足加做各种染色的需要，十分方便，且没有细胞间质染色干扰，阳性物质定位清楚。在查出的阳性细胞涂片和琼脂石蜡双重包埋切片中，根据细胞的形态变化特点，区分出肿瘤细胞的组织类型，阳性检出率主要取决于肿瘤侵犯脏器的程度，临床送检液体量的多少及送检次数等，因为只有肿瘤穿透脏器表面直接暴露在体腔内肿瘤细胞才有可能脱落到胸腹腔积液中。
本研究提示，胸腹腔积液的收集及制片要注意如下几点：①胸腹腔积液抽出后立即制片和及时固定避免细胞自溶；②血性积液应在离心后吸取红细胞表面或中层液作涂片；③含有纤维蛋白较多的标本易形成凝块，可加入少许抗凝剂；④涂片厚薄有适宜，避免太厚使细胞重叠或太薄使细胞数量减少；⑤对查到可疑细胞的病例可反复送检；⑥对用于琼脂包埋的细胞收集要尽量多取液体离心，多收集有形成份；⑦琼脂浓度要控制在2.73％，浓度过高过低都不利于石蜡制片影响染色；⑧琼脂包埋时应尽量吸取组织中水分，以免影响琼脂浓度及切片质量。
| 一种优化的琼脂糖包埋细胞微阵列的制备方法 |
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体液直接离心沉淀制作细胞块石蜡切片
Andy (2010-07-22 14:09:12)
【摘要】 目的 探讨体液内查找癌细胞的新方法，利用免疫组织化学染色方法对体液中细胞进行类型鉴别，提高体液内癌细胞病理诊断的准确性和检出率，进行耐药基因表达产物的检测，提高恶性胸腹水的治疗效果。 方法 目前体液内查找癌细胞，一般使800型离心沉淀器离心沉淀涂片，或者使用涂片离心机，或者使用琼脂包埋细胞块石蜡切片。使用涂片离心机简单快捷，但设备较贵，不能用于免疫组织化学染色检查，有时遇到疑难涂片，很难对肿瘤类型进行分类，有时难以区分是退变的肿瘤细胞还是增生退变的间皮细胞，这就需要细胞块石蜡切片进行免疫组织化学染色。使用琼脂细胞块石蜡包埋切片程序较多，需要事先制作琼脂较为麻烦。体液直接离心沉淀制作细胞块石蜡切片制作程序简便，结果稳定:直接离心沉淀、固定、脱水、浸蜡、包埋、HE和免疫组织化学染色。 结果 50例胸腹水采用普通离心涂片和体液直接离心沉淀制作细胞块石蜡切片均有5例查见癌细胞，未查见癌细胞的胸腹水有10例进行了CK、Vimentin、Mesothelial（HBME-1）、CEA、EMA、免疫组织化学染色，对3例查见癌细胞的病例还进行了P170、GST-π、TOPⅡ免疫组织化学染色，显色良好，背景清晰。 结论 体液直接离心沉淀细胞块石蜡切片方法简单，操作步骤少，不易出差错，结果稳定，不需要特殊的材料和设备，可与平常的日常工作一起进行，HE和免疫组织化学染色背景清晰，效果满意，没有琼脂包埋的那种模糊背景，值得推广使用。特别是对于恶性肿瘤胸腹水效果很好。
【关键词】 细胞块 石蜡切片 免疫组化
利用免疫组织化学染色方法对体液中细胞进行类型鉴别，提高体液内癌细胞病理诊断的准确性和检出率是探讨体液内查找癌细胞的新方法，我院利用此法检测50例报告如下。
1.1 材料 选用成都市第五人民医院病理科2004年4～7月所收到的胸腹水50例。800型离心沉淀器，ZT-12P型生物组织自动脱水机，免疫组织化学染色试剂由基因公司提供。
1.2 方法 将所收到的体液都进行普通离心涂片和体液直接离心沉淀制作细胞块石蜡切片。
体液直接离心沉淀制作细胞块石蜡切片:（1）离心沉淀:将收到的胸腹水立即摇匀后倒入5ml离心管4ml体液离心5min，转速3000r/min ［1］ ，反复进行3～5次。对体液较为清亮的胸腹水需要使用20ml离心管，倒入体液18ml，转速2000r/min，离心时间5min，弃去上清液，再倒入18ml体液反复进行离心10次，再将剩余沉淀物用5ml离心管离心5min，转速4000r/min，如此反复进行多次，尽可能多地从体液中沉淀到足够多的细胞数量。（2）固定:离心完成后弃去上清液倒入10%的中性福尔马林固定2h。（3）脱水、透明、浸蜡:取出沉淀物用双层纱布包裹，进入ZT-12P型生物组织自动脱水机进行脱水，脱水时酒精温度为摄氏45度，75%酒精脱水60min，85%酒精脱水120min，95%酒精脱水120min，无水乙醇Ⅰ脱水90min，无水乙醇Ⅱ脱水90min，无水乙醇Ⅲ脱水90min，二甲苯透明时温度为摄氏45度，二甲苯Ⅰ透明30min，二甲苯Ⅱ透明30min，浸蜡时温度为摄氏60度，石蜡为生物组织切片石蜡，浸蜡Ⅰ60min，浸蜡Ⅱ60min，浸蜡Ⅲ60min（其方法与普通组织一样）。（4）包埋:在包埋时必须将细胞块从多个角度切碎后再进行包埋。这一步很重要，因为细胞在不同的层面分布密度不同。如果不切碎沉淀物包埋，所切的切面有可能细胞数量少或者没有肿瘤细胞分布在该层面。（5）切片:切片厚度为3μm。（6）HE染色步骤:①切片在恒温干燥箱内脱蜡50min，温度为摄氏60度;②）二甲苯Ⅰ脱蜡10min;③二甲苯Ⅱ脱蜡5min;④无水乙醇洗去二甲苯1min×2;⑤95%酒精1min;⑤90%酒精1min;⑦85%酒精1min;⑧自来水洗2min;⑨苏木精染色1min～5min;⑩自来水洗1min;○111%盐酸酒精分化20s ［2］ ;○12自来水1min;○13稀氨水（1%）反蓝30s，自来水洗1min;○14伊红染色1min;○15自来水1min;○1685%酒精脱水20s;○1790%酒精脱水30s;○1895%酒精Ⅰ2min;○1995%酒精Ⅱ1min;○20无水乙醇Ⅰ2min;○21无水乙醇Ⅱ1min ［2］ ;○22切片在恒温干燥箱内干燥15～30min，温度为摄氏60度;○23二甲苯Ⅰ2min ［2］ ;○24一甲苯Ⅱ2min;○25一甲苯Ⅲ1min;○26中性树胶封片，完成制片过程。
部分细胞块可根据需要进行免疫组织化学染色，其方法与普通组织免疫组织化学染色相同，在这里使用二步法Envision染色方法:（1）脱蜡，水化组织切片;（2）预处理组织切片;（据一抗具体说明而定―，酶修复或热修复;（3）蒸馏水漂洗，置于PBS中;（4）滴加3%的过氧化氢阻断过氧化物酶，避免孵育30min;（5）蒸馏水漂洗，置于PBS中5min二次;（6）在37摄氏度下一抗孵育120min;（7）PBS漂洗5min二次;（8）在37摄氏度下Envision孵育45min;（9）PBS漂洗5min二次;（10）色源底物溶液DAB显色，光镜控制;（11）蒸馏水漂洗;（12）复染封片（试剂由基因公司提供）。
普通离心涂片，将收到的体液使用5ml离心管离心5min，转速3000r/min，弃去上清液，摇心沉淀物，将沉淀物均匀地涂在载玻片上，用乙醇-冰醋酸液固定30min，HE染色。
2 结果
免疫组织化学染色背景清晰，显色良好。
胸腹水普通离心涂片和体液直接离心沉淀制作细胞块 石蜡切片结果见表1。
表1 胸腹水普通离心涂片和体液直接离心沉淀制作细胞块石蜡切片结果（略）
3 讨论
在50例胸腹水中离心涂片和细胞块石蜡切片均在相同的3例内查见癌细胞，该3例阳性均通过组织学切片证实，其余47例通过治疗痊愈，没有使用抗癌药物胸腹水消失。胸腹水离心涂片和细胞块石蜡切片在肿瘤细胞检出方面没有显著差异，但细胞块石蜡切片获得的肿瘤细胞更多，可以进行免疫组织化学染色，免疫组织化学染色背景清晰，显色良好。特别是可以进行耐药基因表达产物的检测，对肿瘤化疗具有重要的帮助。可以通过免疫组织化学染色进行肿瘤细胞分类提高诊断质量。对于退变的间皮细胞和退变的肿瘤细胞有时难以区别，使用免疫组织化学染色标记细胞的类型，可以提高诊断的准确性。用细胞块石蜡切片进行免疫组织化学染色，背景清晰，阳性表达清楚，与组织学切片无明显差别。体液直接离心沉淀细胞块石蜡切片方法简单，操作步骤少，不易出差错，结果稳定，不需要特殊的材料的设备，可与平常的日常工作一起进行，背景清晰，效果满意，没有琼脂包埋的那种模糊背景，值得推广使用。特别是对于恶性肿瘤胸腹水效果很好。
参考文献
1 邱瑞成.应用超声波快速石蜡技术制作细胞切片.实用医院临床杂志，2004，1（3）:55.
2 王伯，李玉松，黄高，等.病理学技术.北京:人民卫生出版社，2000，76-139.
（编辑李 梁）
作者单位:611130四川省成都市第五人民医院病理科
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本帖最后由 于 2006-12-16 22:27:00 编辑
体液直接离心沉淀制作细胞块石蜡切
http://www.100md.com/html/DirDu/2005/08/13/70/72/53.htm
http://www.100md.com 徐华 尹万 张莉 苏旭
目的 探讨体液内查找癌细胞的新方法，利用免疫组织化学染色方法对体液中细胞进行类型鉴别，提高体液内癌细胞病理诊断的准确性和检出率，进行耐药基因表达产物的检测，提高恶性胸腹水的治疗效果。 方法 目前体液内查找癌细胞，一般使800型离心沉淀器离心沉淀涂片，或者使用涂片离心机，或者使用琼脂包埋细胞块石蜡切片。使用涂片离心机简单快捷，但设备较贵，不能用于免疫组织化学染色检查，有时遇到疑难涂片，很难对肿瘤类型进行分类，有时难以区分是退变的肿瘤细胞还是增生退变的间皮细胞，这就需要细胞块石蜡切片进行免疫组织化学染色。使用琼脂细胞块石蜡包埋切片程序较多，需要事先制作琼脂较为麻烦。体液直接离心沉淀制作细胞块石蜡切片制作程序简便，结果稳定:直接离心沉淀、固定、脱水、浸蜡、包埋、HE和免疫组织化学染色。 结果 50例胸腹水采用普通离心涂片和体液直接离心沉淀制作细胞块石蜡切片均有5例查见癌细胞，未查见癌细胞的胸腹水有10例进行了CK、Vimentin、Mesothelial(HBME-1)、CEA、EMA、免疫组织化学染色，对3例查见癌细胞的病例还进行了P170、GST-π、TOPⅡ免疫组织化学染色，显色良好，背景清晰。 结论 体液直接离心沉淀细胞块石蜡切片方法简单
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本帖最后由 于 2006-12-16 22:55:00 编辑
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介绍一种新的细胞块制作方法 王永生 李玉红 任玉波 临床与实验病理学杂志060125关键词：离心沉渣;蛋白支架;蛋清凝聚、石蜡包埋分类号：R446.8;R361.2 文献标识码：B 文章编号：1001-7399(2006)01-0099-01 |
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细胞块技术的基本原理将样品离心,细胞和微小组织块被高度浓缩后用蛋清凝聚、石蜡双重包埋,再制成切片.文献报道制作细胞块的支架有琼脂及合成胶水,但这两种物质通透性差,影响脱水、透明和浸蜡,造成制片困难和染色效果差.我们用0.1%蛋清液代替琼脂或合成胶水,操作简单,效果较好,现介绍如下.…… |
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