研究生一名，在做HC时候，IHC目标区不着色，即使延长DAB着色时间也没有反应；但是附近的孔洞却有显著着色。请问哪里出了问题，哭了55555555555。 我推测如下: 1.因为是骨组织我选择乐固定4C 36h，是不是太长了? 2.封闭非特异性抗原，选用了5%BSA牛血清蛋白封闭1小时，但二抗是基因科技的驴抗兔/鼠 的，是不是应该用驴血清? 3.用的一抗稀释液为WB的一抗稀液?但是据组内其他人说，WB的一抗稀释液用于IHC并不会有影响? 4.抗原修复是用的枸缘酸，105℃的烘箱内将反应釜中放置40min，是否修复时间/温度不足? 5.孔洞着色(比如说血管周or破骨陷窝)是不是因为边缘挂上的二抗没洗掉呢。 求救!!!