研究生一名,在做HC时候,HC目标区不着色,即使延长DAB着色时间也没有反应；但是附近的孔洞却有显著着色。请问哪里出了问题,哭了55555555555. 我推测如下: 1.因为是骨组织我选择乐固定4C36h,是不是太长了? 2.封闭非特异性抗原,选用了5%BSA牛血清蛋白封闭1小时,但二抗是基因科技的驴抗兔/鼠 的,是不是应该用驴血清? 3.用的一抗稀释液为WB的一抗稀液?但是据组内其他人说,WB的一抗稀释液并不会有影响 4.抗原修复是用的枸缘酸,105C的烘箱呢内将反应釜中放置40min,是否修复时间/温度不足? 5.孔洞着色(比如说血管周破骨陷窝)是不是因为边缘挂上的二抗没洗掉呢。 求救!!!