各位老师，求关注，谢谢！

1. 一抗用PBS代替，正常导管不着色；而加Her-2在37度孵育一小时，正常导管着色，求原因？

2.Her-2胞浆也着色，是不是一抗过后没有冲洗干净？

 步骤：

1.常规切片，65度烤片90min。

2.常规脱蜡至水，4度PBST浸泡过夜

3.复温，PH9.0的EDTA修复，高压锅持续喷气2分钟

4.冷却，PBS冲洗。3%双氧水10分钟

5.PBS冲洗，一抗37度一小时，阴性对照用PBS代替

6.增强子15分钟，PBS冲洗

7.酶标二抗15分钟，PBS洗

8.DAB15分钟，水洗

9.复染、分化、脱水透明封片。

请问：

1、Her-2试剂是自己稀释还是用即用型？

2、是否有组织对照？

另外建议：

1、一抗4℃度过夜孵育

2、显色时间15分钟过长，建议不要超过10min

附件：阴性对照片-正常导管 一抗用PBS替代