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HE染色出现问题,急求帮助!

黑黑的非洲 离线

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楼主 发表于 2015-11-09 09:34|举报|关注(0)
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 各位大神,本人最近在做常规石蜡染色,核颜色总是很淡,并且出现染料沉积。同样的蜡块,去其他医院做,染色就很漂亮,排除了脱水浸蜡的问题。我换了染色剂,用跟其他医院一样的染色剂,依然颜色很淡。把返蓝液换成流水冲洗十分钟,还是颜色淡。伊红后面加了80%,90%的梯度酒精,还是没有解决问题。请问可能是哪个环节出问题?

1

二甲苯

10 min     

2

二甲苯

10 min

5

100%乙醇

2min s

6

100%乙醇

2min s

7

95%乙醇

2min s

8

80%乙醇

2min s

9

70%乙醇

2min s

10

水洗

1 min30s

11

苏木素

10min

12

水洗

5 min

13

分化液

5 s

14

返蓝

10s

15

伊红

2-5 min

16

100%乙醇

1min30 s

17

100%乙醇

1min30 s

20

二甲苯

5 min

21

二甲苯

5 min

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robot2009 离线

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1 楼    发表于2015-11-09 10:04:49举报|引用
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 染色步骤时间看不出问题

0
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  • 黑黑的非洲:  可为什么切片染出来会是那个样子呢。。。
    2015-11-09 11:43
  • robot2009:  切片后烤片延长一些时间试试。用热水返蓝试试。
    2015-11-09 14:51
  • goodli:  切片后烤片延长一些时间试试,然后再用吹风机吹一下
    2015-11-09 15:02
  • 黑黑的非洲:  我换了一家试剂,效果还不错,贝索的
    2015-11-27 12:08

501699385 离线

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2 楼    发表于2015-11-09 13:24:16举报|引用
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 手工染还是机器染色? 

从你的片子来看,初步考虑为脱蜡没脱干净,考虑为二甲苯用太久了或者是试剂换错缸了。


按照我的经验,你现在先分化后镜下观察,估计应该也是没颜色的,然后就是不分化,苏木素染完水洗后看,如果颜色淡就要考虑是不是苏木素试剂问题,或者是脱蜡没脱干净。

如果不分化,颜色很深,那就是你分化液配错了,或者苏木素染色液质量不好。


建议苏木素后水洗一分钟,不过这个不是关键。

伊红,如果是水溶性伊红,后面的梯度酒精时间不要很长,数秒到十几秒内就可以了。

1

goodli
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  • 黑黑的非洲:  我是手动染色的。分化液也是新买的。苏木素染完水系以后自然光下看组织颜色挺深,没在镜下看过。我待会儿镜下看看。是不是不用分化液也OK?我买的是苏木素伊红分化返蓝四种配套的。
    2015-11-09 13:52
  • 501699385:  一般买的苏木素都不是很好用,如果你是成套购买的,按照说明书来做,做不好可以联系试剂公司嘛。分化液用不用要看情况,也要看是什么苏木素,一般常规染色最好是用,这样染出的片子好看。
    2015-11-09 14:03
  • 501699385:  你可以试试分化时间短点,然后伊红后面的酒精时间短点看看。
    2015-11-09 14:08
  • 黑黑的非洲:  我联系了试剂公司,他们也是网上下下来的说明书给我,所以特别纠结。谢谢你那么热心的解答,我下午试试看~~O(∩_∩)0
    2015-11-09 14:34

 离线

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3 楼    发表于2015-11-27 14:15:25举报|引用|编辑
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 第12步改为5-10秒,第13步改1-2秒,第14步改水洗2-5分钟,第15步30秒到1分钟,第16步开始脱水酒精从70%5秒80%5秒95%10秒无水30秒到5分钟,第21步改为苯酚二甲苯(苯酚一份需加热融化加至2份二甲苯中)3-5分钟,第22、23步为二甲苯。

更换第1、2步二甲苯。你第三第四步哪去了?更换第五步无水,此无水乙醇滴加到清水中会出现乳白色时,提示二甲苯过多,需要更换。

1

林女士
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寻找生命的奇迹 离线

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4 楼    发表于2015-11-28 12:04:09举报|引用
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 建议:

1、分化液及返蓝液后应流水冲洗

2、伊红后应梯度酒精

0
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狭路相逢,勇者胜

阿拉丁神灯 离线

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5 楼    发表于2015-12-01 13:37:48举报|引用
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本帖最后由 阿拉丁神灯 于 2015-12-01 13:41:10 编辑

 

1

二甲苯

10 min     

2

二甲苯

10 min

5

100%乙醇

2min 

6

100%乙醇

2min 

7

95%乙醇

2min 

8

80%乙醇

2min s

9

70%乙醇

2min 

10

水洗

min30s

11

苏木素

10min

12

水洗

min

13

分化液

s

14

流水返蓝5-10分钟或氨水返蓝1-5秒

5-10min

15

伊红染完流水冲洗1-2分钟

2-5 min

16

80%乙醇

1min30 s

17

95%乙醇追加两级无水乙醇各1-2分钟

1min30 s

20

二甲苯

5 min

21

二甲苯

min

0
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rop76@163.com 离线

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6 楼    发表于2016-02-23 17:14:31举报|引用
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 看片子感觉是问题出在苏木素染液上面,苏木素过氧化或太碱甚至有沉淀失效了,不过楼主说换过其它医院的染液还是很浅就不知怎么回事了。建议向染得好的医院要些苏木素试染一下。

0
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  • 黑黑的非洲:  谢谢,换了苏木素,改良了步骤,现在效果很好了~
    2016-02-27 09:09

杨成华 离线

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7 楼    发表于2016-02-27 16:14:51举报|引用
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苏木素染液PH不对,苏木素配制有问题。 

0
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