我们实验室在做HER2的FISH试验检测，发现保存时间比较长的蜡块做的时候，绿色信号很好，但是红色的信号特别弱，或者几乎就看不到。出现这种情况是因为蜡块时间太长，或者是当时标本处理有问题造成的吗？

谢谢老师！

细胞信号弱或看不到可能存在的因素：

（1）FISH前期处理不当

（2）后洗液温度、时间及PH是否正确

（3）固定不完全会导致片状染色，探针信号可能较弱或缺失

（4）过度固定会导致持续性自发荧光，探针信号可能较弱或缺失

 老师，请问您用的蜡块是保存了几年的？

 和十年前的固定是有一定关系的，不知道你用的是哪家的探针，有部分国产探针，对环境的PH和湿度是比较敏感的。

排除其他因素影响，蜡块保存时间太长，确实会出现这样的情况，建议做HER2不要用超过两年的蜡块。

时间长的蜡块如果必须要做HER2 FISH，以下方法可能会得到还可以的信号（不能保证）

1.使用更强烈的方法进行预处理，打开蛋白交联，如EDTA溶液高压处理等

2.消化后可以加1%的甲醛再固定一次，提高杂交效率

3.可以的话，尝试深切蜡块，可能里面的细胞DNA降解程度少一些