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悬赏100豆:求巴氏染色褪色后复染方法指导。 (已解答) 100粉蓝豆

清香情浓 离线

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楼主 发表于 2015-08-19 16:48|举报|关注(5)
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 巴氏染色的液基细胞学片子时间久了有褪色,想重新复染,但总达不到最佳的效果,主要问题表现在核的细微结构表达不如以前清晰,比如图片为胸水的液基制片褪色后复染,很纠结那些红不红蓝不蓝的核。

求高手指点步骤中那个环节需要改进,或者提供方案。先谢谢大家了!

我用的脱色步骤是:

----------------脱色------------------

1.旧片子泡二甲苯,直到去掉盖玻片和胶。

2.片子再泡新的二甲苯,3天。

3.过三缸无水乙醇,每缸一天。

4.1%盐酸酒精缸泡30min,脱核色。(1%盐酸酒精=99ml无水乙醇+1ml浓盐酸)

5.放入流水盒子里泡20min,脱浆色。

6.放入无水乙醇待用。

7.片子放在染色板上,不扣制片仓,不能让片子全干要保持水分。(每次2-4张操作)

------------------重染------------------

8.缓冲液(加到细胞圈内)2  ——  苏木素1次,5s  ——缓冲液2次,冲干净 —— 无水乙醇3次,冲干净 ——伊红1次,80s ——无水乙醇冲干净——放入无水乙醇缸,1min——二甲苯,5min以上——封片  

悬赏100豆:求巴氏染色褪色后复染方法指导。图1
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悬赏100豆:求巴氏染色褪色后复染方法指导。图2
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标签:染色
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200406 离线

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1 楼    发表于2015-08-19 18:05:58举报|引用
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 用草酸水溶液和饱和苦味酸水溶液漂洗重染试试

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SOS991229 离线

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2 楼    发表于2015-08-19 20:00:18举报|引用
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这个不懂,要找丁伟老师。不过有个小疑问,为什么要放在二甲苯里面3天?刘勇在很多次会议上说分化的盐酸的浓度不是1%,而是0.3-0.5%。再试试?

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寻找生命的奇迹 离线

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3 楼    发表于2015-08-19 22:50:32举报|引用
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 褪色彻底是做巴士重染的前提条件。

细胞核的染色原理是:细胞核内的染色物质主要是脱氧核糖核酸(DNA)DNA的双螺旋结构中,两条链上的磷酸基向外,带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色,所以,细胞核被染成蓝色。

细胞浆内主要成分是蛋白质,为两性化合物,当pH值在3647之间,即低于等电点时,胞浆中的蛋白质氨基端带正电荷,而EA50染液(由伊红、亮绿、等染料配成)是酸性染料,带负电荷,与氨基端合而使细胞浆染成从而是胞浆显蓝色、绿色、橘黄色或红色

高锰酸钾为强氧化剂,褪色时先用高锰酸钾,可使留在细胞上的金属根(即苏木精染液中的媒染剂)与细胞分离,并阻止苏木精染料色素根与媒染剂中的铝化物形成蓝紫色色素沉淀。草酸具有漂白作用,而且酸能破坏苏木精和伊红的醌型结构,使色素与组织解离,从而达到脱色漂白作用。另外草酸是一种弱酸,与高锰酸钾溶液先后处理后的组织切片处于偏中性环境,有利于着色。常用的褪色剂盐酸乙醇液,对苏木精伊红褪色效果欠佳,细胞着色难以完全脱净。

褪色步骤:

将玻片放人二甲苯(两缸新二甲苯,主要目的是为脱胶彻底)内各30min;先后置人无水酒精、95% 酒精、70%酒精各5min,蒸馏水洗3min。褪色将水化的玻片浸入0.25%高锰酸钾中5min,蒸馏水洗3min;再置人0.5% 草酸漂白2 min,蒸馏水洗3min

重染步骤和您的步骤一样,您再试一下。

2

王小维

congcong..
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狭路相逢,勇者胜

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4 楼    发表于2023-08-31 17:14:23举报|引用
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 各位老师好  巴氏染色的涂片一般放置多久  我的放置4个月已经出现褪色的情况  是染色液的原因吗

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  • tnttnt:  具体多长时间不知道,我这有一张放置一年的片子,没有脱色
    来自Android 2023-09-01 10:12
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