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- 苏木素染色的PH值的问题？
图1
图2
请问大家一般配置的苏木素的PH值是多少？有没有测过？我测过我们的是二点多，看了几篇文章上面写的大都是一点多，二点多。
Ehrlich苏木精染液pH值变化对组织染色的影响
pH值测定在量化评价苏木精染液染色力中的初步应用
那么问题来了，病理学技术和病理技术考试书上写的，染色体的PI是3.3—3.6，染色体的环境的PH值为7.5—7.8，细胞浆的PI是4.7—5.0，胞浆的PH为6.7—6.8
染色的最佳PH为3.6—4.7，如果按书上写的，如果苏木素染液的PH低于3.3了，染色时，环境PH变低，低于他的等电点，那么染色体应该呈碱式电离，带正电，应该不易与苏木素结合才对啊？虽然染色是有很多影响因素的，但是这些化学作用应该是最重要的吧？先染苏木素可以不用考虑胞浆的着色，那就应该PH大于3.6才对啊？
就是不知道苏木素配置后的最佳PH是多少？好像目前没看到有书上介绍过，只看到丁老师的书上说过伊红的最佳PH是3.6—3.8.
不知道下面那图的说法是不是有一定的影响因素？
这个问题想了很久没想明白？希望有老师来解答？
标签：染色
×参考诊断
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yangli02020 离线
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现实中，我们一般配制的苏木素染液确实都是2.6左右，而目前国外市售的苏木素染液ph也大多为2.5。解释如下：
1、细胞浆的主要成分蛋白质等电点ph4.7~5.0，若苏木素染液的ph大于细胞浆的等电点时，胞浆会表现为酸性电离而带负电荷，就会使苏木素染液的正电荷不仅与细胞核的负电荷结合染色，也与胞浆因为其酸性电离而带的负电荷染色结合，以致于造成细胞核与细胞浆的染色难以区分，所以苏木素的ph必然要低于4.7的。2、苏木素染液通过氧化成为苏木红并结合铝离子后，与细胞核的核酸发生染色反应，但其反应部位主要是与细胞核DNA和RNA中的磷酸根基团反应，与DNA和RNA中的碱基和糖基不是主要结合点，而磷酸是强酸不发生两性电离，虽然其碱基和糖基有两性电离，这就是我们常说的细胞核的等电点是3.3~3.6，但由于不是主要结合位点，因此不用考虑常说的细胞核的等电点ph值。
3、而所用的苏木素染液ph值要远远低于4.7的原因是细胞浆里的蛋白质等电点虽然是4.7~5.0，但其中的一些酸性蛋白的等电点远低于4.7，因此染液也应远低于4.7，才不至于发生核浆共染。而这样低的ph也有助于防止苏木素过氧化。
综上所述，因此用的苏木素染液ph一般都是2点几左右。
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yangli02020: 若有错误，还请各位老师指正。2023-07-03 11:11
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501699385: 按照你这种说法harris苏木素应该大于4.7了，因为他核浆共染了？退行性染色可以分化的，按照这种理论，除了某些特殊类型的苏木素，其他的是没有固定的ph。来自Android 2023-08-08 12:56
引用 4 楼 rop76@163.com 在 2015-09-09 11:04:07 的发言:
我也一直有这个疑问，想了好久没有找到满意答案，你找到满意答案了吗？我用PH计测了下苏木素PH，大约2.6.
关于你的配图说明，我想首先要搞清楚染色时细胞核内的DNA环境到底是本身的7.5-7.8PH环境还是苏木素提供的强酸2.6PH环境，前者似乎可以解答，但会有疑问为什么大分子的苏木素染色基团可以进去，而H+却进不去？后者就是你我的疑问，电荷理论是不能解释的，由此是否可以推测还有其它更重要的染色机制？
希望看到你的回复。
通过Al+++氧化苏木素与DNA磷酸结合进行螯合反应；对于H+为何进不去，主要是媒染剂多为过渡金属元素，一至三价的可溶性盐类，或氢氧化物，如铝盐、铁盐及金属含氧酸等。在这些金属离子或原子的最外层和次外都有电子的空轨道，可以接受其他物质分子或离子中某些原子团中电负性较大的元素的原子提供的孤对电子形成配价键而络合。
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rop76@163.com: “对于H+为何进不去，主要是媒染剂多为过渡金属元素，一至三价的可溶性盐类，或氢氧化物，如铝盐、铁盐及金属含氧酸等。在这些金属离子或原子的最外层和次外都有电子的空轨道，可以接受其他物质分子或离子中某些原2015-09-23 12:20
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rop76@163.com: 子团中电负性较大的元素的原子提供的孤对电子形成配价键而络合。” 还是没看懂，要说电子空轨道，H+本身也有啊。2015-09-23 12:22
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rop76@163.com: 另外，常规病理切片4微米，人体细胞的平均直径在10--20微米之间，所以大多细胞已经被切开，还有细胞已失活，膜的屏障作用已消失，所以染苏木素时核的PH环境就是苏木素染液提供的PH环境。2015-09-23 12:25
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寻找生命的奇迹: 谢谢老师D指导，我下来再查一下2015-09-23 23:09
- 狭路相逢，勇者胜
苏木精染液配制过程中加入醋酸主要是调节染液pH值，当pH值处于合适范围时，不仅可以抵消氧化剂的过度氧化、促进氧化苏木精(即苏木红)与铝盐结合形成蓝色色淀、还可维持细胞核呈酸式电离，增强细胞核的选择性着色，减少苏木精沉渣与氧化膜的形成，所以建议加醋酸。
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rop76@163.com: 恕我直言，您的答案还是没有解答疑惑。加酸后细胞核应该呈碱式电离。至于增强细胞核的选择性着色，是指在强酸环境下，利用细胞核与细胞浆的带电差异（等电点桨高于核）而产生的结果。2015-09-09 11:22
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寻找生命的奇迹: 我的理解是染色体因呈酸式电离，加酸后抑制其电离，从而抑制苏木精再次氧化2015-09-14 13:43
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寻找生命的奇迹: 关于细胞核的染色原理是通过Al+++氧化苏木素与DNA磷酸结合，发生螯合反应；及利用细胞核与细胞浆的带电差异而产生的结果。2015-09-14 13:49
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rop76@163.com: 螯合反应才是重点，带点差异理论是解释不通的，您再梳理一下？2015-09-23 12:12
- 狭路相逢，勇者胜
采用常规使用的改良Lillie—Mayer苏木精染液，具体配制方法如下：苏木精5 g溶于50 ml无水乙醇，50 g硫酸铝钾充分溶于650 ml蒸馏水后与苏木精无水乙醇液充分混合，加入500 mg碘酸钠，最后加入甘油300 ml和冰醋酸20 ml，室温静置1周后备用。不同批次的实验结果显示，苏木精染液染pH值1．5～1．8间变化。
- 狭路相逢，勇者胜
我书上有写：苏木素染液pH值2.8-3.2
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501699385: 谢谢，看到了，在GILL改良苏木精液这篇里面写了的，那这个PH值范围是低于染色体等电点3.3-3.6的的，按病理学技术书上写的应该是不易着色啊，这个您能解释下吗？2015-08-02 21:07
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dingwei: 细胞浆主要成份是蛋白质，是二性化合物，所以有酸式电离和碱式电离。而核酸是酸性的，带负电，不存在酸式或碱式电离之说，只与带正带的碱性染液结合。2015-08-18 14:56 -
501699385: 非常感谢，大概能想到一个合理的解释，您看上面图2，染色体的等电点指酸性蛋白的等电点大约在3.3-3.6。染苏木素时，苏木素的PH值如果低于3.3的话，他还是可以和核酸结合的2015-08-18 20:42
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501699385: 但是此时组蛋白呈碱式电离，就不能结合，但是染胞浆时，如果低于3.3，伊红就容易与组蛋白结合，所以就容易核浆共染，所以就有了书上的3.3-4.7的说法。2015-08-18 20:44
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501699385: 染色体里面的蛋白质应该也是可以和苏木素结合的，福尔根染色应该就是特异性的和核酸结合的，然后再做定量分析。。。最适PH为什么小于等电点而不大于等电点这个问题自己还得琢磨琢磨才行。。。2015-08-19 12:41
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