老师，您好！请问您是做组织FISH检测？还是其他标本（血液、尿液等）FISH检测？

如果是石蜡组织标本：

问题1前期预处理起什么作用，我们实验室的时间是12min ，这个时间是固定的吗？我怎么判断处理的是否合适？

预处理可以帮助溶解碱基核酸蛋白质，可以改善探针与DNA的亲和性，还可提取细胞外基质蛋白质，有效限制细胞外基质蛋白质与探针亲和进入细胞引起自发荧光。预处理你们设置温度是多少？是什么组织？

问题2酶消化的时间各个实验室也不太一致，怎么判断消化的是否合适？

对于这问题，不同地区不同试剂处理的方法不一样，我们在云贵高原，因为雅培的试剂不配套，我们用的是高压煮沸后胃蛋白酶消化处理，不同组织控制不同的温度及时间，效果还不错；至于判断消化是否合适，以前我是消化后，滴加DAPI复染剂，在荧光显微镜下观察消化情况。现在我是看组织的透明度。

问题3洗脱液的作用是什么？洗脱的时间也是固定的吗？

洗脱液的作用是洗掉多余的杂交液及未杂交上的信号；

洗脱的时间：根据不同的试剂，时间不一样，有的使用快洗液，有的用慢洗，要看具体情况。

 我们做的是组织fish,因为刚接触所以有很多问题，谢谢版主老师的耐心讲解！

 关于FISH检测的相关问题，你可以查查文献，还有就是预处理，不同的厂家和试剂的要求是不一样的，消化的试剂不同时间也是不一样的，组织类型不同也有不同的处理，后洗是同样的。建议你们使用全自动原位杂交仪，这样时间和组织类型都能做很好的控制。

 建议有时间读以下文章：

Tojo M et al. Diagn Mol Pathol. 2008 Mar;17(1):59-63

Watters AD. Mol Biotechnol. 2002 Jul;21(3):217-20.

陈慧等，临床与实验病理学杂志 ，2013 Jul;29( 7)：809-811

陈洁等，临床与实验病理学，2012 ，28( 12)：1411-1413

杨月红等，临床与实验病理学2013 ，29( 1)：105-106

王晶等，广东医学　2010，31（5）：555-557

目前的试剂盒是比较成熟的，严格按照说明书的操作是可以得到比较理想的结果的：

非常感谢！

预处理方法很多，不同实验室可能应用不一样，酶消化要吗用胃蛋白酶要吗蛋白酶K都可以，前者消化比后者温和一点。至于判断消化效果您可以参考临床与实验病理学“FISH消化的几点体会”这篇文章，再结合自己的体会。我相信你也会成为FISH的高手