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这是我查的一些资料,请大家集思广益。
(1)部分Hex信号呈现出S型曲线的四分期的前两分期(基线期、指数增长期)的特点,其他曲线基本呈现为阴性(如图1),可能原因: DNA质量不佳、部分孔漏加样品、PCR抑制剂、操作不规范。解决对策,DNA质量不合格则重新抽提DNA;若含有PCR抑制剂比较严重则建议稀释DNA浓度;若点样的操作细节上的不注意,则应严格按照操作规程;由于八联管中八个位孔其引物、探针各异,某些位孔对于DNA质量要求是比较严格的,导致出现该种同标本不同位孔的扩增结果,因此,在操作过程中应注意细节。
(2)FAM通道结果是总体上扬的情况(如图2),出现该种情况主要原因是荧光PCR反应是一个极其灵敏的反应体系,只有一点点的信号都能够被荧光PCR仪器所收集,其中对于这种整体上扬的情况是其灵敏度表现的一种表现。解决对策,优化Taqman探针提高整体的特异性,使阴性体系中的微弱扩增极大降低,提高稳定性。
(3)大部分FAM起尾,可能是气溶胶污染或操作不规范(如图3)。