各位老师，请教一个最基本的问题，her2结果是数出红色信号的总和除以绿色信号的总和吗？

首先在DAPI下找到肿瘤细胞，并看胞核边界完整、DAPI染色均一、细胞核无重叠；再看绿色CEPl7信号清晰的细胞；最后看HER2信号。可以用三通模块，但不好计数，可能会漏数信号。

目前判读最常用的是《乳腺癌HER2检测指南(2014版)》：

首先在HE染色切片上确认浸润性癌区域，然后在10×物镜下，于FISH切片上找到与HE染色切片上相同的组织细胞结构。要求至少找到2个浸润性癌区域，然后在40×物镜下扫描整张切片，观察是否存在HER2表达的异质性以及切片的质量，再于100×物镜下通过特异的单通道滤光片观察癌细胞核的FISH结果，并进行信号计数和比值计算。细胞信号计数：应选择细胞核大小一致，胞核边界完整、DAPI染色均一、细胞核无重叠、绿色CEPl7信号清晰的细胞，随机计数至少20个癌细胞核中的双色信号。

判读标准：

1、当HER2/CEP17比值≥2.0时，为HER2阳性；HER2/CEP17比值＜2.0，但平均拷贝数/细胞≥6.0时也为HER2阳性。

2、HER2/CEP17比值≥2.0，但平均拷贝数/细胞＜4.0的病例是否该视为ISH阳性，目前存在一定争议。

3、若众多信号连接成簇时可不计算，视为基因扩增。

4、HER2/CEP17比值＜2.0且平均拷贝数/细胞＜4.0时为HER2阴性。

5、HER2/CEP17比值＜2.0且平均拷贝数/细胞≥4.0但＜6.0，FISH不确定。

对于不确定病理应再计算20个细胞核中的信号或由另外一个分析者重新计数；如仍为临界值，则应在FISH检测报告中注明，或重复进行FISH或ISH检测。

荧光显微镜观察。

随机计数20个肿瘤细胞，统计出Ratio值（20个细胞核中红色信号总和/20个细胞核中绿色信号总和）。

Ratio＜1.8为阴性。表示标本无Her-2基因扩增。

Ratio＞2.2为阳性。表示标本存在Her-2基因扩增。

Ratio在1.8-2.2之间时为临界值，可增加计数细胞60-100个，或者重新做FISH检测。

（严格判断应该是这样）

 谢谢老师的指教！

 谢谢老师的详细讲解，是不是先在绿光下找到信号较高的细胞，数出绿色信号，然后再转换到橙光下数瓷细胞的红色信号啊？能在三通模块下同时数红，绿信号吗？