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流式细胞仪的临床应用:
1.流式细胞术在肿瘤学中的应用流式细胞术可以检测肿瘤细胞增殖周期、检测肿瘤细胞表面标记、癌基因表达产物、进行多药耐药性分析、检测凋亡;
2.流式细胞术在血液学中的应用检测白血病和淋巴瘤细胞、活化血小板、造血干细胞(CD34+)计数、白血病与淋巴瘤的免疫分型、网织红细胞计数、细胞移植的交叉配型和免疫状态监测;
3.流式细胞术在免疫学中的应用可以进行淋巴细胞及其亚群分析、淋巴细胞免疫分型、检测细胞因子。
检查过程
流式细胞DNA分析:直接用可产生荧光的核酸染料(如碘化丙啶)对胸水中细胞进行染色,流式细胞仪分析胸水细胞的DNA含量、细胞周期分布和DNA倍体数。
流式细胞术常规检测时的样品制备:
(一) 直接免疫荧光标记法
取一定量细胞(约1X106细胞/ml ),直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应(如做双标或多标染色,可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入),孵育20~60分钟后,用PBS(pH7.2 ~7.4)洗1~2 次,加入缓冲液重悬,上机检测。本方法操作简便,结果准确,易于分析,适用于同一细胞群多参数同时测定。虽然直标抗体试剂成本较高,但减少了间接标记法中较强的非特异荧光的干扰,因此更适用于临床标本的检测。
(二) 间接免疫荧光标记法
取一定量的细胞悬液(约1X106细胞/ml ),先加入特异的第一抗体,待反应完全后洗去未结合抗体,再加入荧光标记的第二抗体,生成抗原-抗体-抗抗体复合物,以FCM检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光。本方法费用较低,二抗应用广泛,多用于科研标本的检测。但由于二抗一般为多克隆抗体,特异性较差,非特异性荧光背景较强,易影响实验结果。所以标本制备时应加入阴性或阳性对照。另外,由于间标法步骤较多,增加了细胞的丢失,不适用测定细胞数较少的标本。