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Feulgen染色原理

曾文超 离线

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楼主 发表于 2014-03-04 09:30|举报|关注(0)
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核酸是由碱基、糖苷及磷酸基团组成的。DNA与RNA不同之处在于其碱基对和脱氧核糖核酸。当组织细胞中的核酸经过1.0N HCl处理后,大多RNA分子断裂并从细胞中脱落下来,而DNA分子中碱基与核酸脱离,核酸被水解形成带游离醛基的结构(如图6)。核酸上的醛基可与Schiff试剂结合而显色,故Feulgen染色是对DNA的特异性染色。在染色过程中磷酸基团间的糖链结构并未破坏。正因为如此,在含有游离醛基的弹性组织和一些脂质组织在Feulgen染色中可引起非特异性染色。但组织经过酸化水解或预先用Sodium Borogydride在染色前处理组织,可防止非特异性着色的出现。

Schiff’s试剂是无色的亚硫酸品红复合物( a complex of basic fuchsin with sulphurous acid。试剂中含有的二氧化硫与水结合后可形成弱酸性的亚硫酸

H+浓度增大时,以上反应平衡式向左侧移动。Schiff’s试剂中,含有BisulphateSodium metabisulphite, Na2S2O5)或Thionyl Chloride,这些试剂皆含有亚硫酸。Schiff’s试剂中的碱性品红(basic fuchsin)结构中含有三苯甲烷(triphenylmethane),

当含醛基的核糖核酸与Schiff’s试剂相结合形成一个复合物,此复合物有颜色改变,

 

到目前为止,对这个复合物形成的反应过程还不完全了解,有人认为核糖核酸上的醛基与亚硫酸反应形成硫酸化合物,而后再与碱性品红中的氨基团结合而成复合物,也有人认为其过程正好相反。与Schiff’s试剂相同功能的试剂有Thionin等,但这些试剂与Schiff’s试剂不同的是它们本身就具有颜色。

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