老师你好，有问题困扰我已经很久了，我们科室开展免疫组化时间还不到一年，量比较少一般一个月有5例病人左右在买入抗体的前三个月一直做出来的片子效果还可以，但三个月后在同样实验条件下开始出现抗体显色部位不正确的情况，排除抗体加错的情况哈，开始以为是抗体效价降低了后来厂家新发来抗体在用过2次后又会出现类似情况，后来也考虑是不是修复方式不对完全按照厂家推荐的修复方式但还是会出现这样的情况，我们的标本采用的是福尔马林固定 65度烤片5小时 脱蜡 3%过氧化氢5分钟 高压上汽后柠檬酸/EDTA修复2分钟.1抗4度过夜/37度1小时 2抗37度30分钟 求解啊，谢谢！

 好的，谢谢您的建议，我会尝试再多做一些。

 烤片时间65度5小时太久了，抗原都弥散了，建议60-62度烤1-2小时就可以了

有时显色时间过长，容易导致非特异性着色，主要在胞浆。

作为老乡，很愿意能帮到你，从你说的表象看实验建议做以下改动：（1抗4度过夜/37度1小时 2抗37度30分钟）改1抗4度过夜/室温1小时；2抗室温30分钟。我曾经遇到染色部位异常的情况，老染色部位异，同批次抗体在别的医院效果就很好。后总结可能原因为：1.固定原因；2.修复过度；3.抗体质量原因；4.一抗浓度过高或实验温度过高、时间过长。建议：1.去别的医院找阳性片做对比实验；2.找其他厂家试剂做对比实验。以上为本人在从事抗体销售多年遇到或听到的一些总结，如有不当请老师们指正！非常愿意和老师共同进步，如有需要亦可电联18618142697

首先楼主必须说出具体的抗体？在什么样的组织中，出现了怎样的结果.大家才好帮你。

再来分析实验步骤，在试验步骤中明显有毛病的是，一抗过夜可以接受，而37℃一小时就过了，二抗也一样，无需37℃，产品说明书中有这种孵育条件？