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- 关于IOD值低的若干因素
当出现批量IOD值低的问题时，我们要从整个实验室的工作去排查，实验室硬件、标本的取材送检、试剂、染液配制、制片流程、染色流程、封片扫描等每一个细节都不能轻易放过。
1、实验室硬件：
① 水质水温：最好使用蒸馏水或过滤水；在室温偏低时要注意用水的温度，可以先将水在生化培养箱中预热；
② 生化培养箱：恒温是进行DNA染色的重要条件，直接关系到染色的成败，使用前需要用水银温度计校准温度；
③ 电子天平：精密称量，避免振动、气流等的影响；
④ 磁力搅拌器：搅拌器的正常搅拌保证DNA染液的质量；
⑤ 玻璃器具：量具（量筒、移液器）刻度准确、洁净；染缸、广口瓶洁净干燥；
2、标本存放、运送不当或细胞保存液过期失效导致IOD值低；
3、试剂相关：
① 购买分析纯(AR)的试剂；
② 试剂存放于避光干燥处，冰乙酸在低温易凝固，室温过低时应在温箱存放；
③ 不使用存放时间太长或过期失效的试剂；
4、染液配制：
① 配制染液的玻璃器具用前用后都要洗干净，以免污染配制的染液；
② 严格按照比例配制，规范操作；浓盐酸偏多或偏少，DNA染液加水过多或5N HCL加量不准会导致IOD值偏低；
③ 选用合适的量具量取试剂，正确读数，将染液配制误差降到最小；
④ 配制时间掌握好，B.S及5N HCL提前配制，充分混匀，让5N HCL冷却到室温；DNA染液临用现配；
⑤ 盛装染液的广口瓶贴上相应瓶签，以免染色时错拿错用；
⑥ 配制好的B.S及5N HCL可在室温存放，室温过低时应在温箱存放，避免染色时染液温度偏低；
⑦ DNA染液配制要注意放入搅拌籽和加入5N HCL；
⑧ DNA染液的搅拌：搅拌瓶盖上瓶盖，在避光、恒温的生化培养箱中进行，注意搅拌的速度和时间；不要打开搅拌器加热开关；
⑨ DNA染液的过滤：在生化培养箱中过滤，过滤完后盖上盖子放置在生化培养箱中备用；
⑩、梯度酒精要保证脱水效果，适时更换；
5、制片流程：细胞加水稀释后放置时间过长会导致细胞退变，重新制片时最好用标本瓶中剩余标本制片；
6、染色流程：
① 严格按照FEULGEN染色流程进行染色操作；
② 特别注意各步骤的温度和时间要求，最好所有步骤都在生化培养箱中进行；5N HCL酸解温度偏低、偏高或时间过短、过长，DNA染色温度偏低或时间过短都会导致IOD值偏低；
③ 每次清洗要洗干净，避免上一步骤染液的残留；
④ 清洗后沥干染缸中多余的水，以防稀释下一步骤的染液；
⑤ B.S和5N HCL不要多次重复使用；
7、其他问题：
① 脱水要彻底；
② 扫描仪器问题：应注意扫描光路调整，扫描前设置背景校准等；
③ 染料A或/和染料B保存不当致染料失效。
实验室人员在工作中要保持认真负责的态度，对每一个环节严格把关，按照制片染色规范操作，避免出现染色失误。
以上大致列举了导致批量IOD值低的常见问题及注意事项，欢迎各位补充。
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