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关于IOD值低的若干因素

zhl598 离线

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楼主 发表于 2013-05-27 15:46|举报|关注(0)
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当出现批量IOD值低的问题时,我们要从整个实验室的工作去排查,实验室硬件、标本的取材送检、试剂、染液配制、制片流程、染色流程、封片扫描等每一个细节都不能轻易放过。
    1、实验室硬件:
        ① 水质水温:最好使用蒸馏水或过滤水;在室温偏低时要注意用水的温度,可以先将水在生化培养箱中预热;
        ② 生化培养箱:恒温是进行DNA染色的重要条件,直接关系到染色的成败,使用前需要用水银温度计校准温度;
        ③ 电子天平:精密称量,避免振动、气流等的影响;
        ④ 磁力搅拌器:搅拌器的正常搅拌保证DNA染液的质量;
        ⑤ 玻璃器具:量具(量筒、移液器)刻度准确、洁净;染缸、广口瓶洁净干燥;
    2、标本存放、运送不当或细胞保存液过期失效导致IOD值低;
    3、试剂相关:
        ① 购买分析纯(AR)的试剂;
        ② 试剂存放于避光干燥处,冰乙酸在低温易凝固,室温过低时应在温箱存放;
        ③ 不使用存放时间太长或过期失效的试剂;
    4、染液配制:
        ① 配制染液的玻璃器具用前用后都要洗干净,以免污染配制的染液;
        ② 严格按照比例配制,规范操作;浓盐酸偏多或偏少,DNA染液加水过多或5N HCL加量不准会导致IOD值偏低;
        ③ 选用合适的量具量取试剂,正确读数,将染液配制误差降到最小;
        ④ 配制时间掌握好,B.S及5N HCL提前配制,充分混匀,让5N HCL冷却到室温;DNA染液临用现配;
        ⑤ 盛装染液的广口瓶贴上相应瓶签,以免染色时错拿错用;
        ⑥ 配制好的B.S及5N HCL可在室温存放,室温过低时应在温箱存放,避免染色时染液温度偏低;
        ⑦ DNA染液配制要注意放入搅拌籽和加入5N HCL;
        ⑧ DNA染液的搅拌:搅拌瓶盖上瓶盖,在避光、恒温的生化培养箱中进行,注意搅拌的速度和时间;不要打开搅拌器加热开关;
        ⑨ DNA染液的过滤:在生化培养箱中过滤,过滤完后盖上盖子放置在生化培养箱中备用;
        ⑩、梯度酒精要保证脱水效果,适时更换;
    5、制片流程:细胞加水稀释后放置时间过长会导致细胞退变,重新制片时最好用标本瓶中剩余标本制片;
    6、染色流程:
        ① 严格按照FEULGEN染色流程进行染色操作;
        ② 特别注意各步骤的温度和时间要求,最好所有步骤都在生化培养箱中进行;5N HCL酸解温度偏低、偏高或时间过短、过长,DNA染色温度偏低或时间过短都会导致IOD值偏低;
        ③ 每次清洗要洗干净,避免上一步骤染液的残留;
        ④ 清洗后沥干染缸中多余的水,以防稀释下一步骤的染液;
        ⑤ B.S和5N HCL不要多次重复使用;
    7、其他问题:
        ① 脱水要彻底;
        ② 扫描仪器问题:应注意扫描光路调整,扫描前设置背景校准等;
        ③ 染料A或/和染料B保存不当致染料失效。
    实验室人员在工作中要保持认真负责的态度,对每一个环节严格把关,按照制片染色规范操作,避免出现染色失误。
    以上大致列举了导致批量IOD值低的常见问题及注意事项,欢迎各位补充。

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蓝宝石6628 离线

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1 楼    发表于2013-05-28 06:34:51举报|引用
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peach 离线

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2 楼    发表于2013-05-28 13:07:30举报|引用
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村姑007 离线

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3 楼    发表于2013-06-02 15:43:10举报|引用
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123abc 离线

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4 楼    发表于2013-06-03 09:02:27举报|引用
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903073253 离线

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5 楼    发表于2013-06-03 14:39:28举报|引用
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村姑007 离线

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6 楼    发表于2013-06-23 20:21:24举报|引用
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 DNA染液在冰箱中保存,温度低,染色之前要回温吗

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123abc 离线

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7 楼    发表于2013-06-24 10:03:22举报|引用
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敖根 离线

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8 楼    发表于2013-06-24 11:30:12举报|引用
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903073253 离线

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9 楼    发表于2013-06-26 11:27:20举报|引用
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如日之昇0如月之恒 离线

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yp尹萍 离线

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lewis 离线

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谨记初心

5wei 离线

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学者002 离线

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学者002 离线

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15 楼    发表于2013-07-27 12:19:06举报|引用
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敖根 离线

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16 楼    发表于2013-07-28 16:49:54举报|引用
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村姑007 离线

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17 楼    发表于2013-07-29 15:25:06举报|引用
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敖根 离线

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敖根 离线

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19 楼    发表于2013-08-05 09:36:56举报|引用
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lewis 离线

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20 楼    发表于2013-12-17 16:43:23举报|引用
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