图片: | |
---|---|
名称: | |
描述: | |
当出现批量IOD值低的问题时,我们要从整个实验室的工作去排查,实验室硬件、标本的取材送检、试剂、染液配制、制片流程、染色流程、封片扫描等每一个细节都不能轻易放过。
1、实验室硬件:
① 水质水温:最好使用蒸馏水或过滤水;在室温偏低时要注意用水的温度,可以先将水在生化培养箱中预热;
② 生化培养箱:恒温是进行DNA染色的重要条件,直接关系到染色的成败,使用前需要用水银温度计校准温度;
③ 电子天平:精密称量,避免振动、气流等的影响;
④ 磁力搅拌器:搅拌器的正常搅拌保证DNA染液的质量;
⑤ 玻璃器具:量具(量筒、移液器)刻度准确、洁净;染缸、广口瓶洁净干燥;
2、标本存放、运送不当或细胞保存液过期失效导致IOD值低;
3、试剂相关:
① 购买分析纯(AR)的试剂;
② 试剂存放于避光干燥处,冰乙酸在低温易凝固,室温过低时应在温箱存放;
③ 不使用存放时间太长或过期失效的试剂;
4、染液配制:
① 配制染液的玻璃器具用前用后都要洗干净,以免污染配制的染液;
② 严格按照比例配制,规范操作;浓盐酸偏多或偏少,DNA染液加水过多或5N HCL加量不准会导致IOD值偏低;
③ 选用合适的量具量取试剂,正确读数,将染液配制误差降到最小;
④ 配制时间掌握好,B.S及5N HCL提前配制,充分混匀,让5N HCL冷却到室温;DNA染液临用现配;
⑤ 盛装染液的广口瓶贴上相应瓶签,以免染色时错拿错用;
⑥ 配制好的B.S及5N HCL可在室温存放,室温过低时应在温箱存放,避免染色时染液温度偏低;
⑦ DNA染液配制要注意放入搅拌籽和加入5N HCL;
⑧ DNA染液的搅拌:搅拌瓶盖上瓶盖,在避光、恒温的生化培养箱中进行,注意搅拌的速度和时间;不要打开搅拌器加热开关;
⑨ DNA染液的过滤:在生化培养箱中过滤,过滤完后盖上盖子放置在生化培养箱中备用;
⑩、梯度酒精要保证脱水效果,适时更换;
5、制片流程:细胞加水稀释后放置时间过长会导致细胞退变,重新制片时最好用标本瓶中剩余标本制片;
6、染色流程:
① 严格按照FEULGEN染色流程进行染色操作;
② 特别注意各步骤的温度和时间要求,最好所有步骤都在生化培养箱中进行;5N HCL酸解温度偏低、偏高或时间过短、过长,DNA染色温度偏低或时间过短都会导致IOD值偏低;
③ 每次清洗要洗干净,避免上一步骤染液的残留;
④ 清洗后沥干染缸中多余的水,以防稀释下一步骤的染液;
⑤ B.S和5N HCL不要多次重复使用;
7、其他问题:
① 脱水要彻底;
② 扫描仪器问题:应注意扫描光路调整,扫描前设置背景校准等;
③ 染料A或/和染料B保存不当致染料失效。
实验室人员在工作中要保持认真负责的态度,对每一个环节严格把关,按照制片染色规范操作,避免出现染色失误。
以上大致列举了导致批量IOD值低的常见问题及注意事项,欢迎各位补充。