请问各位同仁，皮肤组织如何做免疫荧光IgG、IgM等染色，是用石蜡切片还是冰冻切片，谢谢！

 冰冻切片做

 可以用冰冻切片，也可用石蜡切片。只是操作上有些区别

 石蜡荧光技术操作程序

1、脱蜡至水

2、PBS洗   3×5min

3、滴加胃蛋白酶（1：50）抗原修复10分钟，在37℃恒温箱

4、PBS洗   3×5min

5、用猪血清封闭20min

6、倾去血清

7、滴加荧光标记的抗血清，37℃恒温箱30min

8、PBS洗   3×5min

9、甘油封片

 冰冻荧光技术操作程序

1、穿刺后所示的标本放于浸有生理盐水的湿润纱布上，放入瓶内，置于-20℃冰箱中冷冻保存，如果远程运输则要置于有冰块的冰桶中，尽量早做

2、用冰冻切片机切片，每例需切5张，片厚约5um，注意切出备用片，切片前把组织放入滤纸上把水吸干

3、切片放入丙酮中固定10min（时间不宜过长，过长则破坏组织），取出晾干（可以用吹风机吹干，不要甩，防止掉片，大约10min左右可干）

4、放入PBS中换3次水，每次5min

5、把片子多余水分擦干，仅在组织周围留少许，放在湿盒中，分别加IgA、IgG 、IgM、 F、C3，每张约25ul，若怀疑系统性红斑狼疮则需增加CIQ，滴加标本处画圈

6、把滴加好抗体的湿盒放入37℃的恒温箱中，30min至1h，恒温箱中药放入温度计以随时观察温度

7、从恒温箱中取出湿盒，把片子置于PBS中，每次5min，换3次

8、如果当时看，就擦掉组织周围水，直接在荧光镜下观察，如果暂时不看，就要封片，用甘油+PBS（两者之比1:1）封片

9、看片时，暗室，紫外灯，在镜头上滴一滴甘油，使镜头与玻片间有甘油做介质，看片后用镜头纸擦干镜头