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ARMS技术简介

dingwei 离线

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楼主 发表于 2012-11-19 09:57|举报|关注(3)
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     目前,突变扩增阻滞系统(amplification refractory mutation system,ARMS)已成为国际上肿瘤个体化分子检测最重要、最先进的技术之一,其在临床应用中的优势已被业内专家广泛认可。
ARMS技术利用特异引物对突变靶序列进行高精准PCR扩增放大,与此同时,利用探针对扩增产物进行检测,在实时荧光定量 PCR平台上实现对样品DNA中稀有突变的检测,以达到对基因突变检测的高特异性和高灵敏度。ARMS方法检测灵敏度明显高于直接测序法等其他方法(表1),可检测出样品中含量低至0.1-1.0%的突变基因;该方法在设计上可以最大限度地缩短目标产物的长度,可以解决石蜡包埋组织标本提取的DNA大部分片段化而无法得到准确检测结果的难点;该方法结合实时PCR平台实现扩增时闭管操作,操作简单,无需产物的后处理,能最大程度地避免扩增产物的污染。目前,全球只有两家企业拥有ARMS技术和相应产品,厦门艾德生物医药科技有限公司拥有自主知识产权的ADx-ARMS专利——引物改造技术、独特的缓冲体系以及二次扩增放大的多重设计,厦门艾德凭借ADx-ARMS®技术成功开发了一系列的分子诊断产品(ADx®-EGFR、ADx®-KRAS、ADx®-BRAF等),是我国首批获得国家药监局《医疗器械注册证》和欧盟认证的产品,已在我国100多家三甲医院使用,并远销30多个国家和地区;跨国制药公司阿斯利康等国内外知名机构通过对ADx®-EGFR等产品的严格对比和论证,认为艾德生物医药的技术和产品均已达到国际先进水平,其用于检测EGFR、KRAS、BRAF等基因突变具有简单、方便、快速、灵敏的优点,仅需90分钟即可得到准确结果,故易于在临床开展。
表1  基因突变检测方法灵敏度及费用的比较。

  • ARMS技术简介图1
    图1

注:
① ADx-ARMS®为厦门艾德具有完全自主知识产权的环形引物双扩增技术;scorpion ARMS 为DxS公司的ARMS技术
② 此表整理自中国医学科学院梁智勇教授执笔的《中国非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体基因突变检测专家共识》

ADx-ARMS产品使用注意事项。
 检测所用DNA的质量非常重要。由于肿瘤的复杂性,所采集的临床样品往往会混有正常组织细胞,不同类型样品正常细胞混杂程度不同,而且提取的DNA纯度和质量也因样品类型而改变,尤其是用福尔马林固定的石蜡切片样品,福尔马林会对DNA有交联和降解作用,因此请按下面推荐样品类型顺序收集样品并提取DNA用于检测:新鲜病变组织>冰冻病理切片>石蜡包埋病理组织或切片>胸水、血浆、肿瘤脱落细胞。
 一般DNA用量以10 ng/反应为宜,但对于提取质量较差,应相应增加DNA用量。尤其是福尔马林固定的石蜡病理样品,因为福尔马林对DNA的交联作用,该类样品中的DNA较易片段化和降解,虽然紫外分光光度计测量的浓度DNA较高,但实际加入反应中的有效DNA量并不足够。
 建议在每次PCR反应中,每份样品和阳性质控品(STD)、阴性对照(NTC,自备纯化水)共同进行分析。应该严格区分阳性质控品和反应试剂的使用,防止污染试剂,造成假阳性。
 实验时注意防止外源DNA对试剂的污染,注意先加完样品DNA后再进行阳性质控品的操作。推荐在制备反应试剂和添加DNA模板时,使用单独、专用的移液枪和滤芯枪头。进行反应试剂制备的地点应当与添加模板的地点相隔离。
 所有化学药品都具有潜在的危险性。具有PCR实验室上岗证的人员才能使用本试剂盒。在首次使用本试剂盒前,公司技术支持人员对操作者进行培训。操作时,请穿着合适的实验室工作服、并佩戴一次性手套等防护性措施。使用过的试剂盒为临床废弃物,应该妥善处理。
 PCR实验室应具有3个不同的分区,分别为试剂准备间、样本制备间、扩增间。3个分区应存在压力差,试剂准备间>样本制备间>扩增间。
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本帖最后由 dingwei 于 2012-11-19 10:06:57 编辑
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本人观点纯属个人偏见,希望大家独立判断,正确引用!中华病理技术网:http://www.zhbljs.com/
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蓝宝石6628 离线

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1 楼    发表于2012-11-19 10:58:37举报|引用
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kelan1218 离线

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2 楼    发表于2012-12-07 11:15:35举报|引用
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请教下ADx-ARMS®环形引物双扩增技术与 scorpion ARMS 为DxS公司的ARMS技术的区别?及优缺点?


 

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学到手,才是自己的。

荷语莲心 离线

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3 楼    发表于2012-12-23 20:10:58举报|引用
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  统(Scorpion ARMS),是将 ARMS  Scorpions 实时 PCR 技术相结合的一种新技术。 具有高度敏感性和特异性。目前在国内少数医院已经开始应用。

该技术所用探针为 Scorpion 探针, Scorpion 探针是一种新型的探针, 由一条发夹结构的探针和一条引物构成, 探针的 5' 端和 3' 端分别标有报告荧光和淬灭荧光, 3'端通过PCR blocker(一个非扩增的单体 , 防止探针退火后的延伸)与引物的 5' 端相连。 在自由状态, 报告荧光和淬灭荧光很接近, 不产生荧光。 变性阶段茎环结构打开, 退火时引物与模板结合并延伸, 环区与新合成的目的基因的互补区域结合, 此时 Scorpion 探针与 PCR 产物在同一条 DNA 链上, 是分子内的结合。 由于发夹结构打开, 报告荧光和淬灭荧光分离, 因此可检测到报告荧光发出的荧光信号。 由于 Scorpion 探针中序列特异性引物和探针在同一分子上, 因此信号的产生特别快。

引自 EGFR 基因突变及其检测方法的研究进展 分子诊断与治疗杂志 2011年第3 151-57 
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  • 学海无涯苦作舟:  请问“变性阶段茎环结构打开, 退火时引物与模板结合并延伸, 环区与新合成的目的基因的互补区域结合, 此时 Scorpion 探针与 PCR 产物在同一条 DNA 链上, 是分子内的结合。”怎么理解?
    2015-05-18 13:33

kelan1218 离线

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4 楼    发表于2012-12-25 14:47:22举报|引用
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谢谢

 

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drfug 离线

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5 楼    发表于2013-07-03 23:16:58举报|引用
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谢谢,能有更详细的吗?

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drfug 离线

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6 楼    发表于2013-07-03 23:39:39举报|引用
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我现在是一团浆

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eaphea 离线

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7 楼    发表于2013-07-05 11:08:54举报|引用
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 基因突变检测方法灵敏度及费用的比较 图片显示不了。

特别想知道ARMS的费用比直接测序低多少?

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寻找生命的奇迹 离线

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8 楼    发表于2013-07-09 20:39:24举报|引用
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引用 7 楼 eaphea 在 2013-07-05 11:08:54 的发言:

 基因突变检测方法灵敏度及费用的比较 图片显示不了。

特别想知道ARMS的费用比直接测序低多少?

ARMS法试剂盒较贵,所以应该说高不少!

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狭路相逢,勇者胜

benben520sps 离线

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9 楼    发表于2014-01-12 23:23:10举报|引用
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 我们医院在和艾德公司合作

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  • 学海无涯苦作舟:  请问你们的样本类型大多是什么?配套使用什么提取试剂盒?直接看CT值判断阴阳性吗?
    2015-05-18 13:36
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你的潜力埋藏在你的心灵深处,当你发现它时,它会发出万丈光芒。

筱伊笙 离线

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10 楼    发表于2019-06-13 23:20:19举报|引用
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 谢谢老师,学习了 MARK下

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上善若水,水善利万物而不争
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