我们科室想开展基因重排检测项目，目前在做预实验。根据biomed2系统提示来做，可是一直做不成功，原因也分析不出来。想请教这方面的高手几个问题：

1.提dna所用方法。提dna的过程有什么需要注意的地方？

2.pcr体系及参数设置？

3.电泳后是银染好还是EB染？

4.质控是怎么做？

 1.提dna所用方法。提dna的过程有什么需要注意的地方？

你可以用QIAGEN的试剂盒提取，注意防止污染！

2.pcr体系及参数设置？

根据你们科室需要选适合的基因重排检测(基因重排有很多的基因)，你要去搜索相关文献

3.电泳后是银染好还是EB染？

肯定银染好。EB有致癌性

4.质控是怎么做？

每批引物设计阳性 阴性 空白对照

1、采用 QIAGEN 或者 Omega FFPE石蜡提取试剂盒，按操作流程提取很简单。

2、PCR反应体系根据你订购的酶或者成品PCR反应体系来设定，前期最好把退火温度设定比biomed2的低一度，不赶时间的话反应时间每一步时间设置久点。

3、虽然EB有致癌性，但一般都会用到EB染聚丙烯酰胺胶。

4、一般采用biomed2体系，先只做5管基本含盖了98%.这样做质控也方便。质控可以用到阳性标本也可买成品质控。

不管用什么试剂盒，高质量的模板DNA非常重要，应常规进行DNA质量检测或检测OD260/280等方法。常规设立对照，尤其是石蜡标本，包括阳性对照、阴性对照、内对照（常用actin）和空白对照，以保证检测系统的正常，避免假阳性或假阴性。石蜡组织标本制备的模板DNA浓度不定，加样量要适中，太少可能造成假阴性，太多也会因杂蛋白质的抑制而导致扩增失败。制备DNA模板时，脱蜡和消化一定要彻底，且制备好的模板DNA最好在2-3天内使用。

不知道您有没有Design and standardization of PCR primers and protocols for detection of clonal
immunoglobulin and T-cell receptor gene recombinations in suspect
lymphoproliferations: Report of the BIOMED-2 Concerted Action BMH4-CT98-3936的翻译本

 我们科室新开的，，三年了，分子方面只开了乳腺HER2的FISH检测