巴氏染色法
1.试剂配制
(1)Harris苏木素液(同常规组织染色)
(2)橙黄-G6液:取橙黄-G6 0.5g,溶于95%酒精100ml中,加磷钨酸15mg。
(3)EA36液:
先配制原液(贮备液):
①亮绿液:亮绿0.5g,溶于5ml蒸馏水中,溶解后加无水酒精至100ml。
②俾士麦棕液:俾士麦棕0.5g,溶于5ml蒸馏水中,溶解后加无水酒精至100ml。
③伊红Y液:伊红Y0.5g,溶于5ml蒸馏水中,溶解后加入无水酒精至100ml。
临用前,将上述亮绿液45ml,伊红Y液45ml,俾士麦棕液10ml混合后,再加入磷钨酸0.2g,饱和碳酸锂水溶液1滴。
也可配制EA50液:
3%亮绿水溶液10ml 纯甲醛250ml
20%伊红Y水溶液20ml 冰醋酸20ml
磷钨酸2g(水溶后加入) 95%酒精700ml
2.染色步骤
(1)将固定后的涂片入水、苏木素染核、盐酸酒精分化、返蓝同HE染色。
(2)70%、80%、95%酒精逐级脱水各1分钟。
(3)橙黄G6 3-5分钟。
(4)95%酒精Ⅰ、Ⅱ缸洗各1分钟。
(5)EA36或EA50液5分钟。
(6)95%酒精Ⅰ、Ⅱ缸洗各1分钟。
(7)无水酒精Ⅰ、Ⅱ缸洗各1分钟。
(8)二甲苯Ⅰ、Ⅱ缸透明各1分钟。
(9)中性树胶封固。
3.染色结果:细胞核为深蓝色;鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞胞质为绿色;表层不全角化细胞胞质为粉红色,完全角化细胞胞质呈桔黄色;高分化鳞癌细胞为粉红色或桔黄色;腺癌细胞质呈灰蓝色;中性粒细胞和淋巴细胞、吞噬细胞胞质均为蓝色;红细胞为粉红色,粘液为淡蓝色或粉红色。