我是新手，现在在学做免疫组化。请教各位老师，为什么用了一抗之后还要再用二抗呀？原理是什么？请各位老师详细说说，拜托了！

 如果你用的一抗是生物素标记的一抗，可以不用二抗，加辣根過氧化酶的抗生物素蛋白, 然后加DAB显色。

如果你用的一抗是辣根过氧化酶标记的，可以不用二抗，直接DAB显色。

简单说，加一抗是为了特异性，加二抗是为了放大一抗的信号，便于DAB染色系统的显色，以至于确定一抗与之对应的抗原的存在！

谢谢老师！

根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。