各位老师，我想请教一下：

我在做组化复染时，使用Harris苏木素。分化、返蓝后镜下观察，感觉背景还算干净，但是核着色有些过深。请问可以再次把片子丢入分化液分化吗？

如果可以的话，分化之后还要再次执行返蓝步骤吗。（我们一般使用PBS返蓝。）

另外还想请使用Harris苏木素的同行们指点一下染色时间。我们刚刚从Mayer苏木素换成Harris，目前染色和分化的时间都比较长，染色8min+分化70s左右。我们想同时缩短染色和分化时间。

还请诸位不吝赐教。

谢谢。

 1、可以任何次数分化，分化的目的就是要苏木素深浅适到好处。一次不行，二次，二次不行三次。。。。。分化过头了可以重染苏木素，然后再分化。。。。。（考虑一下为什么要分化）

2、分化完成后，你觉得深浅适当了，就要蓝化。（考虑一下为什么要蓝化）

3、苏木素的染色时间：一般苏木素染色8min并不长；如果觉得分化时间长，说明染色过深了，可以减少染色时间。染色的关键不在于染几分钟、分化几秒钟，而在于根据你的染液怎么把颜色染得最佳，没有固定的时间。