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各位老师,我想请教一下:
我在做组化复染时,使用Harris苏木素。分化、返蓝后镜下观察,感觉背景还算干净,但是核着色有些过深。请问可以再次把片子丢入分化液分化吗?
如果可以的话,分化之后还要再次执行返蓝步骤吗。(我们一般使用PBS返蓝。)
另外还想请使用Harris苏木素的同行们指点一下染色时间。我们刚刚从Mayer苏木素换成Harris,目前染色和分化的时间都比较长,染色8min+分化70s左右。我们想同时缩短染色和分化时间。
还请诸位不吝赐教。
谢谢。
1、可以任何次数分化,分化的目的就是要苏木素深浅适到好处。一次不行,二次,二次不行三次。。。。。分化过头了可以重染苏木素,然后再分化。。。。。(考虑一下为什么要分化)
2、分化完成后,你觉得深浅适当了,就要蓝化。(考虑一下为什么要蓝化)
3、苏木素的染色时间:一般苏木素染色8min并不长;如果觉得分化时间长,说明染色过深了,可以减少染色时间。染色的关键不在于染几分钟、分化几秒钟,而在于根据你的染液怎么把颜色染得最佳,没有固定的时间。