在临床活检工作中，对于各种肿瘤的正确判断，历来是外科病理学的核心问题。因它关系到患者的治疗和预后的问题。在免疫组化技术没开展以前，主要靠HE，特殊染色和组织化学来进行鉴别和诊断各种肿瘤，这些在当时虽然解决了不少的问题，但是对于较为复杂，较为多型性的肿瘤，就不能对其起源及所含的成分作出正确的判断。随着免疫组化工作的开展，给许多以往有待于解释原因的病理诊断上带来了福音。许多以往无法解释原因的病例，经现今免疫组化染色技术的处理后，能够对其起源，相关的抗原或抗体成份给予显示出来，为肿瘤的诊断提断了形态学的依据。虽然如此，对于一些较为复杂的抗原，就要根据具体情况作具体分析。在生物界里面某些细胞仅具有一个抗原的决定簇，这是极少见的，而常见的是具有数百个乃至数千个的抗原决定簇。数量之多但又不是千篇一律，并非都在细胞的表面表达出来，加上细胞的排列有高有矮，有长有短，切片时有的被切到细胞膜，有的被拦腰斩断，因此在一张切片上看到的同一种抗原的表达也不一致，有的在细胞核，有的在细胞膜，也有的在细胞浆，这种现象是由于切片的原因所致。但是，抗原的表达，在原来的表达上就有核、浆、膜之分。有的抗原可在一个部位表达，有的抗原 则可在两个 部位表达 ，例如PCNA，它可以在细胞核表达，也可在细胞浆表达 。有的抗原，可表现为双向表达，如上皮(样)肿瘤间皮肿瘤和滑膜内瘤等，用角蛋白标记时，可有阳性表达，用波形蛋白标记时，也可有阳性表达。对于上述的许多现象，在观察检测时，就要特别地小心，不断地积累经验，以便于更好地鉴别各种抗原的所在部位。某些抗原不是在任何时候能表达出来的它们 需要一定的时间和条件。有人根据肿瘤细胞增生的能力将其分为三个阶段：

1.           进入细胞周期的增殖细胞，这包括G1、G2及M期的细胞。

2.           暂时未进入细胞周期，但在某特定的时期和条件下，使其开始增殖的细胞(GO期)。

3.                               静止的永不再进入增殖周期的细胞，这些细胞己分化成熟，根据新陈代谢的规律，它们逐渐地进行消之阶段。

上述三个阶段中，与肿瘤的发生发展关系最为密切的是增殖细胞。因此，临床检测各种肿瘤抗原的表达，应根据上述 三个阶段来加以区别，仔细加以分析，在作出诊断前，应根据免疫组化的表达，细胞的分化成度来加以区别，不要以为用了某种抗体抗原不表达就确定是不属该抗体来源的肿瘤。有人在检测淋巴瘤活性的研究中，发现PCNA在细胞周期的S期数量增高，G2期下降，核分裂期最低，在  G1期又开始增高。我们在检测各种肿瘤的抗原时发现，在同一病例中，增生的肿瘤细胞抗原表达强，成熟的细胞表达与增生的细胞差不多，幼雅的细胞表达较弱，未分化的细胞呈阴性。基于上述的情况，我们应充分认识到，诊断各种肿瘤，免疫组化起到了重要的作用中，它可以为诊断提供可靠的准确的形态学依据，它为肿瘤的来源的定性，提供了理论及实物。但是，我们也应该认识到，任何事情都 不能有百分之百的准确，免疫组化的检测也一样，有时也会受到未分化细胞的制约，因此，在作出诊断前，应多做多方面的检查，结合各方面的情况，作出正确的判断。为了更好地应用各种抗体来检测相应的抗原，下面我们将介绍常用抗体检测范围。

 

(一)、常用上皮组织及肿瘤标记物

角蛋白分为表皮角蛋白和细胞角蛋白两种，这是根据其分部的部位而分的。表皮角蛋白包括皮肤表皮，消化道粘膜上皮、腺上皮甲状腺滤泡上皮、气管、支气管上皮、肺泡上皮，角膜上皮、前列腺上皮等。细胞角蛋白包括颌下腺，胰腺，胸腺，细胞，肝细胞，肾小管细胞等。目前，应用上述细胞中间丝角蛋白作为抗原所制备的抗体有单克隆抗体和多克隆抗体。角蛋白可有19个亚型 ，分为碱性和酸性，从1-8为碱性，9-19为酸性，分子量40-68不等，复层鳞上皮多为高分子量，单层上皮则多为低分子量，了解这些在临床的鉴别诊断及抗体的应用中都 有极大的帮助。目前，检测这类特质的抗体很多，根据不同的克隆生产出不周类型的抗体。常用的抗体有：

①             单克隆小鼠抗人细胞角蛋白(Monoclonal  mouse anti  human  cytokeratin)克隆为MNF116。

该抗体应用范围，各类的冰冻切片，涂片，细胞培养片和经甲醛固定石蜡包埋的组织切片 。用本抗体检测的阳性组织有：鳞状上皮，甲状腺滤泡上皮消化道上皮，胰腺胆管上皮，肝胆管上皮，角膜上皮等以及发生于上述来源的肿瘤。应该注意的是有一些肿瘤在检测时，可出现两种阳性物，即用两种抗体来检测如采用CK和Vimentin，可出现双向表达阳性的肿瘤有：癌内瘤，子宫内膜腺癌肺腺癌，上皮样内瘤，滑膜内瘤，唾液腺肌上皮瘤，间皮瘤等等。这是由于在这些肿瘤中存在着两种不同的中间丝的缘故。

应用该抗体检测呈阴性的肿瘤有：各种淋巴瘤，各类肌源性的肿瘤，恶性黑色素瘤，骨肿瘤，纤维组织肿瘤，脂肪肿瘤，神经组织肿瘤和精原细胞瘤等。

在检测某些肿瘤时，常可出现这样的问题，在同一张切片上，同样的鳞状细胞癌的细胞，有的抗原表达为强阳性，有的表达为中度阳性性，有的表达为弱阳性，甚至有的呈阴性。这主要是由于各种细胞处于增生的不同阶段，细胞分泌的抗原量不同，因而表达 也不同。

该抗体可用各种方法检测，但最好用真空负压LSAB法。产品说明书注明该抗体稀释度1：50至1：100，我们使用为1：100。

②             单克隆小鼠抗人细胞角蛋白，克隆为LP34。该抗体的使用范围，检测各种组织基本上与①号抗体相同，但效果不如①号。

③             单克隆小鼠抗 人细胞角蛋白，克隆为35BH11。该抗体的特点是：A，可检测几乎所有的非鳞状上皮包括卵巢腺癌，胃肠道腺癌，甲状腺癌，肝癌， 子宫癌，肾癌等。B、不与鳞状上皮起反应。C、对膀胱癌，鼻咽癌，胸腺癌等部分阳性。但是，该 抗体只能用于冰冻切片 ，涂片和细胞培养片。不能用于石蜡切片 。

④             单克隆小鼠抗 人细胞角蛋白，克隆34BE12。该 抗体属于高分子量类型，它可检测鳞状上皮管上皮和 复层上皮的组织及其来源的肿瘤。

适用范围：可用于各种类型的切片 。

 

2. 单克隆小鼠抗人上皮细胞膜抗原 (Monoclonal mose anti human epithelial memberance antigen,EMA)

上皮细胞膜抗原是上皮细胞表面大分子糖蛋白物质，它不仅存在于各种上皮，以及各种上皮来源的肿瘤，也可存在于部分非上皮及其来源的肿瘤，如浆细胞，组织细胞等。

应用EMA来检测正常的组织时，其阳性表达主要在细胞膜上，但在检测肿瘤时，这种阳性物不仅在细胞膜上出现，也可在细胞浆中见到。实验中发现，肿瘤细胞在分化增生时，阳性物表达强阳性。当肿瘤细胞趋于成熟或已成熟时，阳性物表达较弱，肿瘤细胞未分化时，抗原表达呈阴性。

EMA在检测上皮组织及其来源的肿瘤组织时，抗原表达阳性，在检测非上皮来源的肿瘤如浆细胞瘤，滑膜内瘤，上皮样内瘤，平滑肌内瘤，神经鞘瘤，及来恶性神经鞘瘤时，抗原也可表达为部分阳性。因此认为：EMA不是上皮性来源肿瘤所特有的标记物，它的特异性不高。

该 抗体适用范围广，适合于各种类型的切片，应用真空负压LSAB法检测时，稀释度在1：100。

 

自1965年Gotel等从结肠癌分离出一种肿瘤的相关抗原后，经过进一步的研究后发现，它存在于胎儿的肠里，由于人们将其称为癌胚抗原。在实际应用中，CEA是一种广谱的标记物。经实验证明，它对胃癌，肠癌，肺癌，乳腺癌，胰腺癌，子宫颈癌，子宫体腺癌，卵巢癌，皮肤鳞状细胞癌，膀胱移行上皮癌，食道癌等，抗原表达阳性，在上述的同类组织及癌旁类性组织，也可见到阳性物，有文献报导，用CEA标记滑膜内瘤，间皮瘤，上皮样内瘤和脑膜瘤，也可表达阳性。

目前，CEA有两种产品，一是单克隆抗体，另一是多克隆抗体。

①  单克隆小鼠抗 人CEA，克隆为A5B7。

该抗体的特点，纯度高，杂质含量少，很少引起非特异性染色，同时，也不与含糖蛋白的物质起反应，因此，背景清晰干净。

该抗体可检测上述的病种及其来源的组织，适用于各种切片的染色。稀释度为1：100。

②  兔抗人CEA。该抗体为多克隆抗体，纯度不如①号抗体，检测及适应与①号抗体相同，但效果不如①号抗体，且较容易产生背景。稀释度在1：300。

 

4.       山羊抗人甲胎蛋白(Goat anti human alphafeloprotein,AFP)

AFP主要由胎儿肝细胞和卵黄细胞产生的一种酸性糖蛋白少量由胎儿的胸腺、肺、胃、肠道的细胞产生。AFP也不是一种肝癌特有的标记物。初用时把AFP作为原发性肝癌的一项特异性诊断指标。随着免疫组化的深入开展和研究的深入进行，实验结果证明：AFP的升高不仅在原发性肝细胞癌的病例，在生殖细胞肿瘤卵黄瘤和睾丸胚胎癌的病例也可大量见到。

用AFP检测后显示阳性的病例有：原发性肝细胞癌，胃癌，卵黄   瘤和睾丸胚胎癌等。其阳性 表达部位主要在细胞浆，也有少量在细胞膜和细胞核上。

该抗体适合于各种切片的标记，可用任何一种 免疫 方法来进行染色，稀释度为1：100-1：300。

上述四种类型的抗体可作为来源于上皮的肿瘤及其它来源的肿瘤的区别。只要损伤正确，抗体的质量没问题，就可获得满意的结果。使用时应根据不同的组织，不同的形态结构，来选择合适的抗体。当然有的肿瘤决不是用一两种抗体就能够把它们给予区分开来。因此，要根据不同的情况合理使用抗体，以便作出正确的诊断。

 

(二)常用的间叶源性组织及其肿瘤的检测抗体   

间叶源性组织范围广，内容多，它包括肌肉，纤维结缔组织，脂肪，血管，周围神经，骨，软骨，淋巴等组织。由于这方面涉及的东西较多且较复杂，因而在上述方面所发生的肿瘤，是肿瘤病理学中最棘手和最疑难的问题之一。随着免疫组化技术在肿瘤鉴别诊断中的应用，已经克服了许多以往无法克服或者难以克服的问题。当前，应用于这方面检测的抗体越来越多，下面将介绍几种常用的抗体：

1.                   波形蛋白(Vimentin ,Vim)

Vim是原始的中间丝，它存在于所有的间叶组织细胞中，可以向神经胶质，肌源性细胞和上皮细胞中间丝演变。Vim是一种单克隆抗体，临床应用来作鉴别诊断的有：鉴别癌与内癌，前者阴性，后者阳性；鉴别小细胞性肿瘤，这时应多用几种抗体，如CK，LCA和Vim，如为淋巴瘤，尤文氏瘤或神经母细胞瘤，Vim为阳性；鉴别黑色素瘤和低分化癌时，Vim阳性。

应用Vim检测肿瘤阳性的有：HDR-S细胞，B免疫母细胞形淋巴瘤，浆细胞瘤，T 免疫母细胞及多形性T 淋巴瘤，平滑肌瘤和肉瘤，纤维瘤和肉瘤，脂肪瘤和肉瘤，横纹肌肉瘤，血管瘤，粘液瘤，神经纤维瘤，鞘瘤，恶性神经鞘瘤，恶性纤维组织细胞瘤，纤维组织细胞瘤，恶性巨细胞瘤，间叶肉瘤，骨瘤和骨肉瘤，骨巨细胞瘤，软骨细胞瘤，骨软骨瘤，软骨母细胞瘤，软骨肉瘤，滑膜肉瘤，精原细胞瘤，黑色素瘤和恶性黑色素瘤，脊索瘤癌肉瘤，尤文 氏瘤，脑膜瘤，卵泡膜细胞瘤，颗颗细胞瘤，间皮瘤，等等。

在正常组织中，Vim标记阳性组织的有：

平滑肌和横纹胶肌细胞，肺泡吞噬细胞，血管及内皮细胞，肝脏枯否氏细胞，滑膜细胞，浆细胞，奇形细胞，室管膜细胞，卵巢颗粒细胞，黑色素细胞等。

Vim是目前用来鉴别上皮性肿瘤还是间叶源性铁常用抗体之一，不过，在应用于鉴别肿瘤时，应多选用几种抗体。

Vim的抗体现市售的有几种：

⑴单克隆小鼠抗Vim克隆3B4，该抗体稀释度较高，可在1：200，它适用于各种切片，但在使用前必须抗原修复。

⑵克隆小鼠抗猪Vim，克隆V₉，该抗体较早前使用，从已检测的大量病例情况分析，该抗体效果不错。但该抗体最大的缺点是稀释度较不理想，仅在1：10左右，由于稀释度不大，标记的例数较少，成本较高，现已较少使用。

 

⒉     Von Willebrand因子。

这种抗体在旧叫法中被称为第Ⅷ因子相关抗原，如今被 称为Von Willebrand因子，它可在各种内皮细胞和巨核细胞的胞浆中找到，因此在临床的应用中，它常被用来检测由内皮细胞来源的各种肿瘤，同时也用来检测骨髓标本中巨核细胞的增殖。该抗体使用前须做抗原修复。注意抗体有单抗 及多抗之分。

 

⒊CD₃₄

该抗体被认为是一种稳定的，可靠的血管内皮细胞及其来源的肿瘤的标记物。它对毛细血管，小血管内皮细胞显示强阳性，对中至大血管内皮细胞量选择性阳性，对软组织肿瘤，肿瘤 毛细血管，血管管和血管肉瘤的内皮细胞呈阳性，对淋巴管内皮阴性。使用时须做 抗原修复。

 

⒋CD₃₁

该抗体与CD₃₄的标记范围基本一样。

 

在横纹肌的微细结构中，有明暗带之分，在明暗带的中央有一薄膜称为工膜。在心肌纤维结构中，也有相似的工膜。这些结构的主要成份就是由肌间线蛋白构成的。此外，在心肌的闰盘，平滑肌中，也含有肌间线蛋白。

Desmin为一种中间丝蛋白，正常时可分布于平滑肌细胞，心肌细胞骨骼骨细胞和肌上皮细胞。临床应用时常用来检测上述细胞来源的肿瘤如子宫肌瘤及肉瘤，胃，肠道 肌源性肿瘤各形，横纹肌肉瘤和肌上皮瘤等。

该抗体适应于各种组织切片，经抗原修复后结果更佳。

 

骨髓肌的微细结构在电镜下可见到肌原纤维是由1-2千条平行的肌丝集成的来组成，肌丝分为粗肌丝和细肌丝两种。粗肌丝由许多豆芽状的肌球蛋白组成。在心肌和平滑肌发育分化中期，也可见到肌球蛋白。

目前，临床应用的有两种抗体。

①     Myosin(skeletal)

这种抗体用于检测骨髓肌及其来源的肿瘤它适合于各种切片，抗原修复后结果更好。

②     Myosin(smooth Muscle)

这种抗体用于检测肌上皮及平滑肌细胞以及这方面来源的肿瘤，它适合于各种组织切片，抗原修复后可获得更好的结果。

 

肌原纤维由两种成分组成，细肌丝和粗肌丝。细肌丝则由肌动蛋白，原肌球蛋白和肌原蛋白三种成分组成，其中的肌动蛋白，其分子呈球状，它们互相连接形成长链，每一条细肌丝都由两条肌动蛋白分子所构成。

现临床用于检测肌动蛋白的抗体有如下几种：

①     单克隆小鼠抗人肌动蛋白，克隆为HHF35。它是一种广谱标记抗体，既可以用于检测骨髓肌和骨髓肌来源的肿瘤，也可以用于检测平滑肌，血管平滑肌，心肌，肌上皮细胞及其来源的肿瘤，它适合各种组织切片，不用微波抗原修复，也能获得很好的结果。稀释度为1：100。

②     单克隆小鼠抗人肌动蛋白(平滑肌)克隆为1A4。该抗体主要用于检测平滑肌，心肌，血管平滑肌，肌上皮细胞及其来源的各种肿瘤，实验证明，毛细血管也可被清楚地显示出来。它适合各种切片，稀释度为1：100。

 

淋巴组织的肿瘤成分较为复杂，有些与其它上皮来源的肿瘤在形态上较相似，鉴别较困难。因而免疫组化对淋巴组织肿瘤的定性较准确。淋巴瘤是原发于淋巴结和淋巴结以外各种淋巴组织的恶性肿瘤。根据瘤细胞的形态和结构不同，把它们分成两大类即何杰金病(Hodgkins disease,HD)和非何杰金淋巴瘤，(Non-hodgkins lymphoma,NHL)。

应用抗体来检测淋巴瘤的抗体目前有很多，光CD系列就有百余种，虽然各类繁多，但临床常用的抗体，主要有以下几种：

该抗体主要用于检测正常白细胞即淋巴细胞(T.B)，粒细胞，组织细胞和单核细胞及其来源的肿瘤。适合各种切片，不需特别处理。稀释度1：200。

 

T淋巴细胞在胸腺中进行分裂分化，形成了具有各种特异性抗原受体的T细胞，因此它又被 称为胸腺依赖细胞。T细胞数量最多，功能又是多方面的根据它们的功能可将其分为 辅助T细胞，抑制T细胞和细胞毒性T细胞。

T淋巴细胞在淋巴结的分布通常在副皮质区，因此免疫组化显色后，在副皮质区可找到阳性细胞，临床常用的有两种抗体。

①                   T细胞，CD45RO克隆为人WHL-1

该抗体几乎可标记所有的胸腺细胞还可检测CD4和CD8以及成熟活化T细胞的静止T细胞亚群及其来源的淋巴瘤细胞，该抗体适合于各种切片，不需各种处理方法，仍可获得很好的结果，稀释度为1：100。

②                   T 细胞，CD3，克隆为PS1

该抗体用来检测正常和新生的T细胞，对早期的T细胞有较高的特异性。虽然它的特异性较高，但敏感性不如①号抗体。临床应用时，可两种抗体同时应用，以利于提高诊断的准确率。它不需各种方法处理。稀释度为1：100。

 

3.                     B细胞，CD20  克隆为L26

B淋巴细胞跟T淋巴细胞不一样，它的分化分裂是在胚胎肝及骨髓内进行。根据实验，在淋巴结中的B淋巴细胞，主要分布在滤泡反应中心。经实验证明，反应中心是B细胞各个时期转化的场所，基本上需经四个时期：

第一期成熟的小淋巴细胞接受抗原信息后体积逐渐增大，细胞核表面出现凹陷或沟纹似裂隙被称为小核裂细胞。第二期细胞继续增大，核周围有少量胞浆，如此被 称为大核裂细胞。第三期核逐渐变化发展，成为圆形或椭圆形，裂 纹也随着变化而消失，核内出现核仁，胞浆增多，RNA和蛋白质合成相继增多，此时被称为小无核裂细胞。第四期，细胞继续增大，比原来的小淋巴细胞大好几倍，核呈圆形或椭圆形，可见核分裂，胞浆丰富，被 称为大无核 裂细胞。由于B细胞在不同时期的变化，因此在标记时，应使用不同类型的抗体，对其不同时期进行标记和判断。

在临床应用中，检测淋淋巴瘤不象研究淋巴瘤，那样细致，只要将其分形就可以了。

该抗体不需特殊处理，稀释度为1：100。

 

4.                     骨髓组织细胞抗原，克隆：Mac387

应用抗体的呈色可将淋巴瘤分为三大类形即T、B淋巴细胞形和组织细胞形。该抗体可检测正常的粒细胞，血液中单核细胞和组织中的组织细胞及其来源的肿瘤。

该抗体不需特殊的处理方法，稀释度为1：100。

 

该抗体主要用于标记B 细胞主要用于，B细胞淋巴瘤，B细胞白血病等的鉴别诊断，标记时应做抗原修复。

 

6.CD56

 

经研究发现脑组织中有三种同2酶即dd.dr和rr。NSE属于rr形。它不仅存在于神经细胞及其轴突中，而且存在于各种内分泌细胞及其有关肿瘤细胞内。有人做过实验，应用NSE检测69例APUD系统肿瘤，均表达为阳性，在16例外分泌腺如胰腺癌的检测中 仅有2例阳性。可见NSE对于检测APUD系统方面的肿瘤是一个很有用的抗体。它适合于各种组织切片，有单克隆和多克隆两种抗体，应用抗原修复，可获得更佳结果。

 

该抗体可检测 神经无和 神经内分泌细胞及其来源的肿瘤如：嗜铬细胞瘤，甲状腺髓样癌，胰岛细胞瘤，垂体肿瘤，类癌等。抗体分为单抗 和多抗，可适合于各类切片，需做抗原修复。

 

3.                                   胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrilary acidic protein,GFAP)克隆为6F2

GFAP是中间丝蛋白之一，是星形细胞和室管膜细胞及其来源肿瘤的有效标记物，据对60例星形细胞瘤的免疫组化显示，其结果均为阳性。因此，它是星形胶质细胞瘤和室 管膜瘤的首选抗体。早期使用的有多克隆抗体，近来使用的为单克隆抗体，不需要作任何的处理，适应于各种切片。

 

4.S-100

S-100是从牛脑中分离出来的一种蛋白，经大量的研究发现。它有三种亚形，S-100ao、S-100a和S-100b。它在人的雪旺氏细胞，室管膜细胞，星形细胞， 神经纤维，神经鞘，皮肤黑色素细胞等都可检测到。因此，它可用于检测上述组织及其来源的肿瘤。

该抗体适合于各种切片，不需任何处理，可获很好结果。稀释度为1：200，应尽量控制背景。

 

(六)其它

1.           甲状腺球蛋白(Thyroglobulin,TG)克隆为2H11

TG是甲状腺滤泡细胞合成的一种糖白，由于它的特殊关系，是众多抗体中特异性较高的一种抗体，仅用于检测甲状腺组织及其来源的肿瘤，不需任何处理，可获很好结果，适应于各种切片，但应请注意控制背景。

 

2.           乳头状瘤病毒(Bovine Dapiuomavirus,BPV)

该抗体主要用于检测生殖系统传染性的疾病如尖锐湿疣，病毒存在于上皮的挖空细胞中，根据实验认为，在检测显色后，并非所有的挖空细胞都含有病毒，这可能是由于切片或者在制片的过程中，保存不好而丢失。在50例病例的标记中，均可见到含量不等的病毒。该抗体为多克隆抗体，应用真空负压检测时，稀释度可为1：400，应注意背景的控制，不经任何处理，也可获得很好的结果，适用于各种切片。

 

3.           增殖细胞核抗原(Proliferation cell nuclear antigen,PCNA)

它是一种酸性蛋白，分子量36KD，在DNA复制时为 DNA聚合酶的辅助物，当细胞进入增殖周期时，此蛋白即已出现。它是细胞增殖周期的标记物，尤其是“S”期。适用 于各种切片。

 

4.           牛碱性磷酸酶(Cow calf alkaline phosphalase,CAP)

该抗体可检测正常的成骨细胞，小肠细胞，前列腺上皮细胞，全身含有CAP的细胞。但临床常用它来检测骨肿瘤及前列腺肿瘤CAP的含量，该抗体不需作任何处理，适合于各种切片。

 

5.           雌激素受体，(Estrogen receptor ,ER)

ER是一种具有特定功能的酸性蛋白，是传递激素信息的一种特异性的物质。经研究发现，这种物质存在于癌细胞的细胞核中，如乳腺癌、子宫内膜腺癌，宫颈癌等癌细胞核中。目前，临床在治疗这些癌症病人时，首先需要检测ER是否阳性，如为阳性，治疗是采用抗激素疗法，如为阴性，治疗则采用激素疗法。总之ER检测的阳性与否都直接关系到治疗方案的选择，是判断患者预后的硬性指标。但是目前检测ER时，必须要做好充分彻底的抗原修复，据实验认为，要取得满意的结果就必须要做长时间的水浴式的抗原修复，即将切片浸入抗原修复液的容器中，然后一起置入锅中煮沸持续四十分钟，如果抗原修复时间不够，不充分，切片也可呈阴性。除此之外，也可采用高压修复压，真空负压和微波修复。

 

6.           孕激素受体(Progesterone  receptor ,PR)

PR与ER一样，在乳腺癌，宫颈癌，子宫内膜腺癌等的治疗中，都 被列为必须检测项目，为制定医疗方案，判断预后硬性指标，一般的检测都是ER和PR同时进行，但阳性可以是两种都阳性或阴性，或一阴一阳，它们的检测方法，抗原修复都一样。

 

八、免疫组织化学在乳腺癌的作用(Breast carcicnoma)

乳腺Ca是女性中最常见的恶性肿瘤之一，全世界每年约有120万妇女发生乳腺Ca,并有50万左右的患者死于这种病。由于这种病严重地危及了妇女的健康，世界上许多有关的机构都开展了对该病的研究，直至现在，根据对该病的治疗和有关文献资料显示，该病在治疗和预后方面已经取得了重大的进展。

当患者被诊断为乳腺癌后，根据目前临床上治疗的需要，提出了重点必须检测的主要免疫组织化学的指标即：Her-2、ER、PR、EGFR、IGBR、P53、CD117、BCL-2、PCNA等。

乳腺的来源起于胚胎外胚层的原始表皮，位于胸前两侧皮下浅筋 膜的浅层与深层之间。肉眼大体为乳头，乳晕和乳腺。从临床的角度常将乳腺分为五个不同的区域，即乳晕区外上象限区，内上象区，外下象限区和内上象限区。其中外上象限区的乳腺组织最为丰富，但也是肿瘤的好发区。一发现该部位有硬块或者异样，就必须及早做检查。

从组织学的角度，乳腺被结缔组织分隔为15-25叶，每叶又分为若干小叶，每个小叶有肌上皮细胞。由单层柱状上皮，复层柱状上皮和复层扁平上皮构成的导管有腺泡，末梢导管，小叶内导管，小叶间导管和总导管。所有这些是乳腺的主要组成成分，除些之外，还有辅助的成分即脂肪、结缔组织、血管、神经、淋巴管等。

乳腺组织，含有大量的脂肪，胶原纤维，在每一块组织中，都含有各种各样的成分，要作好一张HE的切片，也较为困难，因此，对于较特殊的组织，必须特殊处理国。比如大量的脂肪，取材后，可先将其放入乙醚或酒精乙醚混合液中浸泡2-4小时，作除脂处理，然后才与其它组织块作常规处理。另外，由于它胶原纤维较多，脱水较为困难，取材切忌过太大或太厚。

1.         乳腺原位癌，系指癌细胞的生长未突破基底膜。根据其来源和结构，又可将它们分为：①小叶癌，即指癌细胞由小叶上皮细胞发展而来。在一般的情况下，小叶由大小较为一致的圆形细胞所填充，形成大小不等，形态各异的不等小叶，小叶包膜完整，癌细胞不向外浸润生长，核染色深。应用免疫组化标记时，可用 EMA，CK，(广谱)，基本都为阳性或至强阳性。

2.         浸润性导管癌

镜下的组织学形态为多种多样，可以呈弥漫性片状生长，也可呈界限清楚的因巢条索状或呈单个细胞浸润性生长。

肿瘤组织的大小差异大，形状各异，核分裂象较多见，细胞核和核仁明显突出。

应用免疫组化可进行鉴别，用CK(广谱)或用低分子量如，8.18或19型，标记阳性，应用EMA标记，也可显示阳性。

 当患者被确诊为乳腺癌并且实行完成手术后，利用其切除的组织再进行检测，以利于进一步的治疗。目前，对肿瘤的治疗有：①综合治疗，根据肿瘤患者机体状况，肿瘤的病理类型，侵犯范围和发展趋向，合理地有计划应用现有手段以期最大限度地提高治愈率，生存期和生活质量。②手术治疗指对癌症原发灶，引流淋巴组织及其可能受侵蚀的周围组织全部或部分切除的治疗方法。③化学治疗—指应用一种或数种化学药物，通过口服或注射达到治疗肿瘤的方法。④放射治疗是指利用高能电磁辐射(放射线)主要是X线和R线治疗肿瘤的一种方法。⑤生物治疗 通过从体外补充，诱导或活化体内固有的生物反应调节系统，包括具有细胞毒性的细胞和因子，以调整这种生物反应，或通过基因传导，置换增补等基因治疗的思路，或设计对CD分子，基因靶拉或抗原靶位的抗癌抗体疗法和生物导向治疗的方法。⑥内分泌治疗，由于激素能选择性地作用于相应的肿瘤组织，对一般增殖  速的正常组织不会产生抑制作用，因而不会引起骨髓抑制，亦无骨肠粘膜及毛书细胞增殖受到抑制所导致的种种副作用。对于乳腺癌患者来说，在确定其治疗方案前，首先要检测几种指标如：Er,Pr,EGFR,IGFR,CD117,P53,Her-2,Bcl—2,PCNA，等。

 

1.         表皮生长因子受体-2 ( Epidermal growth factor receptor-2,Her-2)被简称为Her-2,neu或者C-erbB-2.它还有3个家族成员即Her-1,Her-3和Her-4。根据研究认为，Her-2和其家族中的三个成员，有着相互间密切的关系和高度的同源性，是一种跨膜糖蛋白。Her-2属于一种原癌基因，位于17号染色体17q21。从其家族成员中，从Her-2的功能和所起的作用，它是最主要的一种，它有三个功能域 ：一个细胞外受体结合点，一个亲脂性的跨膜部分与一个具有酪氨酸激酶活性的细胞区域。当配体细胞表面的异二聚体受体复合物包括Her-2蛋白结合后，导致细胞内酪氨酸激酶的蛋白活化，发生酪氨酸自身的磷酸化。^[14]许多研究表明：Her-2受体基因在细胞因子信号传导通路中以及在控制正常细胞生长与分裂中都扮演着重要的角色。

对于Her-2的研究，已经进行了许多，它在许多肿瘤细胞中， 都可见到过度表达的阳性物。如乳腺癌，结肠癌，肝癌，胃癌等。从目前的情况认为，判断乳腺癌预后的指标，除了原发肿瘤的大小，肿瘤的分期，淋巴结的转移数目，雌激素和孕激素受体的阳性与否外，Her-2也是判断预后的一项指标。

Her-2检测结果阳性与否也直接关系到患者治疗方案的确定。许多研究表明，乳腺癌Her-2阳性的过度表达即阳性强度达到三级的乳腺癌患者，其预后较差，恶性度高，转移明显，生存率降低。

①                  应用什么方法来检查Her-2.

目前，国际上检测 Her-2的方法有，免疫组化法，Fish法，(Fluorescrnce  in  situ  hybridization荧光原位杂交)，Western  blot ,Elisat和PCR法等。在这诸多方法中，最常用，最可靠，最简单，最便利和最经济的方法是免疫组化法，因为它是大多数病理科必备的一门技术，作为病理诊断的辅助手段之一，它是不可或缺的一门技术。目前大多数的病理科，免疫组化技术稳定，质量可靠，技术成熟定性。

②如何对Her-2进行判断。

Her-2是一种跨膜的酪氨酸受体，它的阳性表达在细胞膜上，评判它的阳性以及阳性的强度目前都以四级为基准即阴性(一)；阳性(+)；中度阳性(二)；和强阳性(三)。

有的是以癌细胞占阳性细胞的比例来分级即所有癌细胞都阴性(一)；占癌细胞总数的1-10%为轻度阳性(+)；占癌细胞总数的11-50%为中度阳性(二)；占癌细胞总数为51%以上者为强阳性(三)。

我们认为，应该根据癌细胞表达的情况来评判为最好。癌细胞没表达的为阴性(+)；隐约可见到少数癌细胞的膜不完整的阳性为轻度阳性(+)；部分至大部分的癌细胞阳性，但其膜还不够完整为中度阳性(二)；全部的癌细胞阳性且阳性膜完整为强阳性(三)。

③评判时应注意的问题：

A.切片现象。细胞排列不齐，不在一个水平线上，因而在切片的时候，有的被拦腰切断，将细胞切成两半，这种可以有完整的细胞膜；有的由于细胞排列歪斜，切片时有的只切其一角，有的则切到其盲端或者顶部，这种现象镜下见到   状或断续状。

B.抗原的分泌颗粒。有些抗原，它可被分泌后排泄至细胞浆中，镜下见到有颗粒状反应。

C.抗原的扩散融合，乳腺癌组织被切除离体后，由于标本较大，没有得到及时的固定，导致某些抗原发生游散和融合的现象。

④Her-2的实验结果

在50例乳腺癌患者检查Her-2中，阳性27例，占总数54%；其中轻度阳性(+)9例；占18%；中度阳性(二)7例，占14%；强度阳性(三)11例占22%；我们的结果与有人报道的阳性(过度表达)25-30%基本一致。由此认为，免疫组化技术检测 Her-2是完全可依赖的。

 

2.         雌激素，孕激素，雌激素受体和孕激素受体(Estrogen  and  Estrogen  receptor,Er)

雌激素属于类固醇激素，它的基本结构的特点是在分子中有17位氢的功能存在，如在17位碳原子上羟基置换氢原子称为雌二醇，而在16及17位碳原子上氢被羟基置换则为雌 三醇。^[15]

雌激素的主要功能是：

①       对性器官(如子宫、阴道、外阴器官等)具有特殊的功能，它可刺激其生长，发育。

②       对输卵管的作用主要是促进输卵管肌层的增长，增加其血运，使内膜增生并出现纤毛细胞。

③       对阴道的作用主要是促进上皮细胞的成熟，增生和角化，使粘膜变厚并增加细胞内糖原含量。

④       对乳腺及副性特征的影响主要是促进乳腺腺管的生长发育。

激素这所以能在靶细胞内发挥作用是通过其受体来实现的。^[16]受体具有两项基本功能：其一是识别出特殊的化学信号---配体。其二是用某种方式将配体---受体配合物中的信息信号继续放大，改变靶细胞的生化速率，发生适当的细胞效应。

乳腺是女性激素的靶器官，激素对乳腺的作用是需要通过乳腺上皮内的雌激素受体和孕激素才能实现。正常乳腺上皮细胞可存在Er和Pr，当细胞发生癌变时，Er和Pr可以部分或全部保留，也可以部分或全部丧失。或者可以是Er保留Pr丧失，或者是Er丧失，Pr保留，如果癌细胞仍保留受体，说明该乳腺癌的生长和增殖仍受内分泌的调控，称激素依赖性乳腺癌；如果癌细胞丢失了受体，则该乳腺癌的生长和增殖不再受内分泌的调控。称非激素依赖性乳腺癌。 我们的一组例实验 的结果为：Er 和Pr全阳性者31例，为59.6%，Er和Pr全为阴性者：15例，占28.8%，Er阳性Pr阴性者2例占5.7%，Er阴性和Pr阳性者2例，占5.7%。

①       Er和Pr的检测是对乳腺癌患者确定治疗方案和确定预后的需要。

乳腺癌诊断一经确立，对其治疗前，都 必须进行Er和Pr 的检测，以利于治疗方案的确立，检测的结果一般有如下 几种情况：

A.Er和Pr均为阳性。在癌细胞中，可见到两种受体均为阳性，说明这肿瘤含有的激素受体和功能都与正常细胞一样，都受到激素的调节，因此用内分泌方法治疗有效率较高，达到70-80%。

B.Er和Pr均为阴性。在所有的癌细胞中，均未见到两种受体的反应情况，说明该肿瘤已完全脱离激素的调控。因此，用内分泌方法治疗其效果就不理想，其有效率不足10%。

C.Er阳性，Pr阴性，在少数病例中两项检测可见一项阳性，如Er阳性，Pr阴性，占实验中的5.7%，说明部分肿瘤已 部分脱离激素调控。

D.Er阴性，Pr阳性，这种情况与上述的基本一样，也占少数，约占5.7%。

②       对Er,Pr阳性的判定

判定Er,Pr的阳性与否，应从主要细胞的着色情况来判定，在乳腺癌的癌细胞核中可见棕黄色的阳性物，则可判为阳性。有人认为，具有生物学效应的细胞核内受体才是真正的受体。又可称Ⅰ型受体；而胞浆内的所谓受体，实际上是一种能与性激素结合的大分子蛋白，其功能只是将性激素从胞浆转送到核内的载体作用，实非真正受体，故也可称Ⅱ型 受体。{}中华病理 郑唯强

Er和Pr的判断，不光是判断阳性与否就可以了，还要判断它的强度。目前是以四级为广泛使用的方法，即阴性(一)，阳性(+)，中度阳性(二)和强阳性(三)。一般10%以内的癌细胞阳性为(+)，11-50%的癌细胞阳性为中度(二)，51%以上的癌细胞阳性为(三)

③       Er和Pr的检测方法

Er和Pr的检测方法有很多种，尤其是许多公司都 生产出了专门检测Er和Pr的试剂盒，但从我们的自身的技术条件方面认为，应用一般的抗体，就能检测到满意的结果。不过在检测Er时，必须注意如下问题：

A.抗原修复时，要注意温度。据文献介绍用于检测Er和Pr的抗原修复，最好是用高压修复法，其次才是水浴修复法，但据我们的实验应用微波修复法，都能获得满意的结果。

B.抗原修复时，要注意时间的长短，高压抗原修复时，时间在2-4分钟，微波抗原修复，时间在18分钟。以上。

 

3.         P53。

P53是一种抑癌基因，经研究认为，该基因与人类的许多种恶性肿瘤如乳腺癌，结肠癌、肺癌、肝癌、胃癌等有关。P53肿瘤抑制基因的散发性突发，是所发现的人类恶性肿瘤唯一最常见的基因异常。^[17]它有两种类型：野生型和突变型。野生型半襄期较短，约为20分钟左右，在细胞内的含量较低，由于这种原因，目前应用免疫组化方法来检测无法检测到。它跟DNA有很高的亲合力，可以抑制DNA的合成和复制，从而抑制细胞增殖。突变型半襄期较长，约4-8小时，在细胞内的含量也较高。应用免疫组化方法检测可以被 检测到。肿瘤分化程度的高低与P53蛋白的阳性率之间有显著差异。阳性的强弱与分化程度也密切相关，分化越低，阳性强度超高。这种由于其构象发生改变，对DNA亲合性下降，抑制细胞增殖能力减弱，因此能与一些癌蛋白形成稳定的复合物，使半襄期延长，含量比正常增加。

在一组实验中，乳腺癌P53阳性9例52.9%，阴性8例47%，结肠癌20例，阳性15例，75%，阴性5例25%。子宫内膜癌15例，全为阳性，肺癌17例，阳性76.4%，阴性4例23.5%，在其他肿瘤中，11例，阳性4例36.3%，阴性7例，63.6%。

经研究发现P53抑癌基因位于17号染色体短臂，编码为53kd的核结合蛋白，在正常的情况下，它通过参与细胞周期的负调节而起到调控细胞的分化作用，同时在细胞的凋亡，它可诱导凋亡来触发细胞死亡，阻止具有癌变倾向的基因突变细胞的产生，它也参与 对DNA受损的重要修复过程，由于DNA受损，P53基因产物大量累积，可诱导细胞进入G1期，启动修复系统进行修复，若修复过程失败，它可诱导凋亡来触发细胞死亡，阻止具有癌变倾向的基因突变的细胞产生。^[18]

 

4.         上皮生长因子受体(Epidermdl  grouth  factor  receptor,EGFR)

EGFR经实验证明，它位于第7号染色长臂，和C-erdB-2一样，同属Ⅰ型生长因子受体家旅。是一种酪氨酸激酶受体，主要分布于细胞膜，在有些病例，由于切片的原因，有的可以在细胞浆或细胞核上。在正常的情况下，EGF是一种潜在的有丝分裂因子，当其与靶细胞受体结合时，就能够刺激细胞增殖，这种主要在上皮的快速增殖部位，许多研究表明，EGFR在许多肿瘤细胞中的表达往往比正常组织细胞中的表达要高，这是因为EGFR的基因在肿瘤细胞中复制加快，转录增加的结果。这些现象说明EGF、EGFR在某些旅恶性肿瘤的发生及生长中起一定的作用，如胃癌，大肠癌等。

王仰坤等对99例慢性胆囊炎壁肥厚和13例慢性胆囊炎后壁 肥厚型腺癌的EGFR研究结果是：慢性胆炎囊壁肥厚轻度和中度显示区域性弱阳性表达， 性胆囊炎壁肥厚重度呈现区域性阳性表达。慢性胆囊炎壁肥厚重度。慢性胆囊炎后壁肥厚型腺癌与慢性胆囊炎壁肥厚轻度中度之间的阳性表达差异有显著性P＜0.02。

他们的研究还发现在癌旁组织或在不典型增生细胞和肿瘤细胞的过度区有异常表达，可能是肿瘤周围的细胞受到肿瘤细胞分泌因子刺激开始表达EGFR，而EGFR的表达使“正常”的周围细胞逐渐向恶性表型转化。

陈乔尔等对65例口腔鳞癌EGFR表达的研究中，EGFR+21例。EGFR(二)19例，阳性率为61.5%，研究表明EGFR的超量表达与癌基因的扩增和突变有关。

 

 

 

 

①       Er和Pr的检测是对乳腺癌患者确定治疗方案和确定预后的需要。

乳腺癌诊断一经确立，对其治疗前，都 必须进行Er和Pr 的检测，以利于治疗方案的确立，检测的结果一般有如下 几种情况：

A.Er和Pr均为阳性。在癌细胞中，可见到两种受体均为阳性，说明这肿瘤含有的激素受体和功能都与正常细胞一样，都受到激素的调节，因此用内分泌方法治疗有效率较高，达到70-80%。

B.Er和Pr均为阴性。在所有的癌细胞中，均未见到两种受体的反应情况，说明该肿瘤已完全脱离激素的调控。因此，用内分泌方法治疗其效果就不理想，其有效率不足10%。

C.Er阳性，Pr阴性，在少数病例中两项检测可见一项阳性，如Er阳性，Pr阴性，占实验中的5.7%，说明部分肿瘤已 部分脱离激素调控。

D.Er阴性，Pr阳性，这种情况与上述的基本一样，也占少数，约占5.7%。