楼主 发表于 2007-06-22 18:58|举报|关注(0)

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分子诊断的技术平台：在分子诊断方面，与病理诊断应用比较密切相关的有下列四大技术平台。

1原位杂交技术平台: 探针种类主要有四类：双链DNA、单链DNA、反义RNA和自动化合成的寡核苷酸探针, 各有其本身和应用特点，双链DNA探针储存稳定；单链DNA探针多用于mRNA原位杂交；反义RNA探针制作流程短，制作效率高，但必须注意保存，防止探针降解；而寡核苷酸探针，DNA序列短，自动化合成简便，常采用多探针鸡尾酒式组合应用。目前应用的探针标记物多是非同位素，如生物素、地高辛、碱性磷酸酶和荧光素等。在标记探针杂交的基础上，可进一步采用信号放大系统以增加敏感性。针对生物素、地高辛等标记探针，信号放大系统作用原理可与免疫组织化学抗原抗体反应相同，显色系统也相同。掌握免疫组织化学操作者，不难掌握原位杂交技术。只是起始步以杂交反应代替抗原抗体反应。

2常规PCR(convention PCR)和RT-PCR技术平台: 常规PCR通过它的扩增产物，在凝胶电泳上获知扩增片段的大小，从而识别靶基因，或再采取已知探针进行杂交，或仅根据片段大小作出判断。PCR技术的应用具有广泛性、特异性和敏感性的优势。许多检测项目有待增加靶基因拷贝数的，也必选核酸扩增作为实验基础。RT-PCR：用于检测基因表达水平。在融合基因检测上是比较简而易行，可与原位杂交相辅相成，或选其中之一应用。

3 即时荧光PCR技术平台: 即时（real－time）PCR的诞生，是PCR检测系统的又一大进步。关键技术是荧光标记特异探针的采用。探针型式可是线形的，也可以是短柄圆环式；可以是一条探针，也可以是两条探针，目前基本上应用的有三种类型, TaqMan 探针, FRET（fluorescent reasonance energy transfer）探针, 信标探针。

4 DNA测序和指纹印迹技术平台: DNA测序，由手工操作过度到自动化，开阔了广阔的应用前景; 在做DNA指纹印记（片断分析）方面，能识别人类个体以及特殊细菌克隆。

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