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对免疫组化规范化的一点看法

dingwei 离线

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楼主 发表于 2009-11-12 15:22|举报|关注(2)
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现在,什么都提规范化,很多专家认为,只要厂家提供成品的试剂,照着做,就是规范化;用机器做就是规范化;搞几个操作流程,记录记录就是规范化,常规切片、免疫组化都是如此。个人认为,这些提法并不十分正确。

什么叫规范化:比如苏木素,每个人配出来效果都不一样,染色时间也不一样。然后,厂家就说,我们来配。厂家配出来就一样了吗?我相信一定也不一样,因为苏木素的配制和温度、时间、苏木素批号、氧化程度等等都有关系,就算你配出来是一样的,存放时间不一样,使用的气温不一样,切片的厚度不一样,染色时间都不一样。是不是用了厂家配的就是规范化了,就能用一个时间来规定就染好了?不会。其实说白了,是很多技术员懒,不愿意配而已。因为99%的情况下,厂里配的和你配的没区别,因为染色时间都不能固定,区别只是时间长短而已。那什么叫苏木素染色规范化?我认为,苏木素染色完成后必须用显微镜观察细胞核的深浅,并根据镜下的实际情况决定是否需要再染或分化,这才是规范化。

免疫组化存在的问题更多,有人提出来即用型抗体就是规范化。是不是这样的?就目前来说是不一定:即用型抗体的出现,推动了免疫组化在中国的普及化,为什么?因为中国的技术员不会配试剂,不愿配试剂,怕麻烦,现在也是如此。最好只要几种液体滴滴,免疫组化就做好了,即用型抗体正好满足了他们的要求。也正是这种宣传和教育,导致现在的很多技术员不懂什么叫稀释比,不懂一抗浓度与检测系统的敏感性是有相关性的。只知道买来按说明书做就行,结果是否正确也不知道。其实,这把中国病理技术员给害了。因为现在的免疫组化结果做出来五花八门,毛病很多就出在即用型抗体、出在技术员没有正规的培养和正确的思路,更没了解决问题的办法。用抗体原液的技术员都知道,一抗的浓度和检测系统的敏感性是要相互配合的。比如ER,用SP试剂盒,一般在1:80,用EnVision要1:50,用ChemMate EnVision 1:150 ,用PV9000 1:130;否则,就会出现假阳性(上背景)或假阴性(阳性细胞少)等等。然而,现在的试剂公司,它的即用型一抗只有一种浓度,然而它有多种检测系统,我不知道他们配的一抗是和那一个检测系统相匹配的,他们用不同的检测系统去适应同一种浓度的抗体,所以很多(应该说非常多)的单位做出来的结果都存在问题。更不要说还有不同的修复方法,不同的修复液,其强度都是不同的。

那什么叫规范化,我认为只有根据操作流程,在用不同的一抗稀释比,根据你的抗原修复方法、使用的检测系统、DAB敏感度相匹配,用强弱不同的组织做阳性、阴性对照做出的结果,那才叫规范化。而且,每次新进不同批号的抗体都要做对照(我们叫摸抗体稀释比、摸条件)。

有人说我们单位小,买不起原液,我告诉你,那是厂家忽悠你的,他们用朝三暮四的理论骗了你。因为稀释液的利润远远高于原液。他们没有告诉你,原液可保存几年,而稀释液只有半年左右。越是小单位偶尔用一下,越是要买原液,因为稀释液你可能用一次没就用了,原液买来放着,几年还能用。当然,一年内买几只抗体你可能觉得买稀释液便宜,但如果你根据原液的稀释比算一下,会发现二、三年以后,你就上当了,因为稀释液要贵得多。

那么厂家应该怎么做?他们应该规定抗原修复方法和检测系统,然后选择一种与其相对应浓度的一抗,这样比较科学。目前,免疫组化机器染采用的就是这个模式,当然并不是简单使用配套试剂就一定能做出好的结果,机器也要根据染色强度用孵育时间来调整。手工的话那就更复杂了,但最起码正确率会高的多。免疫组化基础的原理和知识你必须懂,片子必须会看,抗原表达在那必须知道,最好知道什么肿瘤会表达,什么不会表达,出了问题应该知道问题在那儿、怎么解决。否则,你将永远是一个操作工。一个不懂诊断的技术员,一定成不了一个优秀的技术员。

规范化不是我们想的那么简单,是科学地、认认真真地去做每一件事。
标签:规范化
本帖最后由 涣涣 于 2015-11-02 15:22:50 编辑
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amorxyq 离线

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1 楼    发表于2009-11-12 18:04:00举报|引用
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 看了丁老师的话,真是受益匪浅,现在才明白免疫组化还有一个检测系统,丁老师能不能再详细的解释一下这个检测系统呢,应该怎样稀释一抗呢,盼指教。
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sjp 离线

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2 楼    发表于2009-11-12 18:35:00举报|引用
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 支持,我也有同感。
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dingwei 离线

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3 楼    发表于2009-11-12 19:45:00举报|引用
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 检测系统也就是人们常说的二抗:有ABC、SP、SABC、LSAB、PV6000、PV6002、PV9000、EnVision、ChemMate EnVision 、迈新公司还有好几个,世界上还有很多检测系统,每家公司代理不一样,就有什么样的检测系统,当然这里面有些是内容物一样,标签或叫法不一样。各家公司为了更好的表达,不断地在开发新产品。

一抗稀释一般用TBS或PBS,最好用抗体稀释液。根据说明书推荐浓度进行棋盘式检测。如说明书推荐1:100,你就做一个1:50,1:75,1:100,1:150,1:200,然后根据阳性片的背景、定位和染色强度,确定是否还需要更改稀释比或就能找出最佳稀释比。

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Azwangwei 离线

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4 楼    发表于2009-11-12 22:15:00举报|引用
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本帖最后由 于 2009-11-14 09:58:00 编辑

 

谈谈个人对规范一点看法

什么都提规范化,很多专家认为,只要厂家提供规范化的试剂,照着做,就是规范化;用机器做就是规范化。我个人认为是一种偏见(不一定对、大家可以讨论),规范是操作的流程,标准是结果。病理科长期以来发展滞后,主要是病理科长期以来总是跟着厂家走,无论是设备还是试剂都是厂家走在病理科的前面,主要是因为我们的操作不规范、也提不出相应的标准。病理科的进步一定改变病理科跟着厂家的模式,病理科应该制定自己规范、自己标准,任何产品都要通过病理专业质量认证部门认可,才能进入流通环节,才能进入病理科。形成厂家跟着标准走的模式,大家执行一个共同标准,只有这样我们才能真正进入规范化、标准化。同时我们应该明确标准不是最高的,而是最基本的,是大多人或病理科可以达到的,我们目前应该提倡的是低标准,严要求,标准可以根据不同的时期和技术而逐步提高。用机器做就是规范化,特别是现在自动化、智能化的机器,它在某种程度上会比大多人做的好,但机器永远也超不过人的能力。

 

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dahhs
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dingwei 离线

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5 楼    发表于2009-11-13 12:01:00举报|引用
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 非常正确!!!
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小小红 离线

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6 楼    发表于2009-11-21 08:44:00举报|引用
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 看来是不能偷懒?好!以后还是买原液自己配
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diagent 离线

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7 楼    发表于2009-11-21 23:04:00举报|引用
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谈规范化必有规范化的目的、具体内容、行为差异的离散性和分布状态以及执行手段等,商业化和规模化有规范化的社会效益,个体实验室也必须有自身的规范化,执行手段才是规范化保证,总之,规范化是一个认证体系,没有对个体的科学认证体系和标准,谈规范化有意义吗?
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掌心0164 离线

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8 楼    发表于2009-11-22 17:08:00举报|引用
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 这是一个严肃而意义深远的话题:只有中国那天真正的能达到法治而不是人治了就可以实现这个了。

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掌心0164

houfang 离线

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9 楼    发表于2009-11-22 21:32:00举报|引用
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不知国外对免疫组化一抗试剂是如何要求的,原液多,即用型少?
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dingwei 离线

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10 楼    发表于2009-11-23 09:10:00举报|引用
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 国外的一抗在说明书上注明只适用于某一个检测系统。
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3673566 离线

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11 楼    发表于2009-11-23 10:44:00举报|引用
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以下是引用Azwangwei在2009-11-12 22:15:00的发言:

 

谈谈个人对规范一点看法

什么都提规范化,很多专家认为,只要厂家提供规范化的试剂,照着做,就是规范化;用机器做就是规范化。我个人认为是一种偏见(不一定对、大家可以讨论),规范是操作的流程,标准是结果。病理科长期以来发展滞后,主要是病理科长期以来总是跟着厂家走,无论是设备还是试剂都是厂家走在病理科的前面,主要是因为我们的操作不规范、也提不出相应的标准。病理科的进步一定改变病理科跟着厂家的模式,病理科应该制定自己规范、自己标准,任何产品都要通过病理专业质量认证部门认可,才能进入流通环节,才能进入病理科。形成厂家跟着标准走的模式,大家执行一个共同标准,只有这样我们才能真正进入规范化、标准化。同时我们应该明确标准不是最高的,而是最基本的,是大多人或病理科可以达到的,我们目前应该提倡的是低标准,严要求,标准可以根据不同的时期和技术而逐步提高。用机器做就是规范化,特别是现在自动化、智能化的机器,它在某种程度上会比大多人做的好,但机器永远也超不过人的能力。

 

同意。这是一个急待解决的问题,不仅仅是染色和免疫组化,有时单单取材的规范化就很难统一,还是呼吁有关部门在这方面多做工作,多做宣传,在全国各类医院普及才行。
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violet-flute 离线

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12 楼    发表于2010-01-28 16:42:00举报|引用
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 有道理!
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violet-flute 离线

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13 楼    发表于2010-01-28 16:46:00举报|引用
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 别一味相信迈新!!!
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天天田田 离线

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14 楼    发表于2010-01-29 18:53:00举报|引用
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 很是受益,谢谢各位老师
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liujulin 离线

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15 楼    发表于2010-03-05 16:09:00举报|引用
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 晚辈学习了,受益匪浅!
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天边的云 离线

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16 楼    发表于2010-06-19 20:22:00举报|引用
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mingfuyu 离线

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17 楼    发表于2010-06-22 06:52:00举报|引用
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 以下观点可能有点小儿科,望见谅!

每天染的每一种抗体必须有阳性对照和阴性对照。当你看到很好的染色结果,切一块收藏起来,作为以后的阳性对照。

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lihuanlong1231 离线

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18 楼    发表于2015-11-02 15:57:22举报|引用
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