我们医院开展有两年多了，FISH技术比较成熟，以下是乳腺石蜡切片样本FISH实验流程

一、玻片预处理

1、65℃烤片过夜。

2、室温 二甲苯15分钟 X 3次。

3、室温 100%酒精5分钟X 2次。

4、室温 85%酒精、70%酒精各3分钟。

5、室温 去离子水3分钟，用无绒纸巾吸取多余水分。

6、90℃，去离子水煮沸25分钟或免疫组化修复液（PH7.0）煮沸20分钟。

7、待片子室温晾干后，37℃蛋白酶K消化12-15分钟（取0.4ml蛋白酶K储存

液（20mg/ml）溶于40ml 2xSSC（PH7.0），得到蛋白酶K工作液（200μg/ml）。如果是免疫组化修复液，蛋白酶K修复10分钟。

8、室温，2xSSC 5分钟2次

9、室温，70%、85%、100%乙醇脱水各3分钟。

10、自然干燥玻片。

二、变性杂交

杂交仪变性杂交流程

1.56℃，烤片2-5分钟

2、探针准备：①交液8μl

             ②探针2μl

   加入到0.5ml离心管中混匀，离心1-3秒，混匀备用。

3、将10μl探针混合物加于玻片杂交区域，立即加盖盖玻片，用橡皮胶封边。

4、准备杂交仪，共变性条件：83℃ 5分钟，杂交条件：42℃16小时。

三、玻片洗涤与观察

1、46℃，2xSSC 10分钟

2、46℃，0.1%NP-40/2xSSC 5分钟

3、室温，70%乙醇3分钟 

4、暗处自然干燥玻片。

5、室温，将15μl DAPI复染剂滴加于杂交区域，立即盖上盖玻片，15分钟后观察。

四、判断标准

    分别数30个癌细胞的红绿信号数，设红信号与绿信号的比值为K

    ①当K〈1.8时       判为阴性

    ②当1.8〈K〈2.2时  为临界值

    ③当K〉2.2时       判为阳性

    当K为临界值时，要重新数100个癌细胞的红绿信号数，再计算比值。计算仍为临界值的，则要重做或另取材。

Dako也有FISH （白血病和淋巴瘤）诊断的试剂盒，Her2 FISH有FDA认证！

建议使用德国ZytoVision公司的Zytolight FISH Probe（包括：Her2，ALK，ALK-EML4，ROS1，FGFR1，FGFR2，BCR-ABL等等），具有CE/IVD认证，质量稳定，操作简单，建议试试。探针由香港华创贸易国际有限公司提供，电话010-64484022、18611641282。

我院已经开展了，不知你想问什么呢？

 在做时你要注意什么吧？

 我院也要开展这个了 设备已经来了 房间正在装修中

请问下这个是由技术组的老师们操作吗？

还有就是您那里开展了那些组织的？有多少探针？

我院腺体外科要求乳腺病人都做FISH

 FISH注意事项：

1、37℃蛋白酶K消化10-15分钟是关键，要看切片的厚薄和蜡块存放时间的长短。有点麻烦。

2、组织福马林固定时间不能太长，如星期五取材的，星期一制片就可能会减弱。

3、试剂盒有差异，Vysis的产品较好。

 我们也要准备做FISH了。

目前北京市病理质控中心的高子芬教授正在组织培训，如果下一步政策及市场启动，那么将会变成下一个免疫组化。

小弟现在正要开始做FISH实验，我主要是做白血病的，现在不知道用哪家探针较好，VYSIS,KREATECH,金菩嘉的都有推销过，因为小弟以前没有做过相关实验，所以请各位指点一下，哪一家的探针比较好