细胞涂片免疫组化制片固定液固定效果的对比研究                                                  
孙和国,秦伯荣,沈贤娥,何毅民 　                                                                
(上海市第一人民医院宝山分院病,上理海科　20094)0                                               
[关键词]　细胞涂片;　免疫组化;　固定液                                                        
[中图分类号]　R36112　[文献标识码]　B　[文章编号文章编号 (2006)03 - 0232 - 01                 

　　细胞涂片免疫组化制片一般9采5%用乙醇、乙醇和乙              显高于其他组,而且表达较强(图1～3)。另外,4%中性甲醛
醚混合液、丙酮、甲B醇ou、in液、Zenker液等固定液,但标记         固定标本抗原修复3组/5阳性表达,未经修复组1P5 阳性表
阳性率并不高。本研究对几种常用固定液进行了对, 比研达究            。4%中性甲醛固定的标本和未经固定的新鲜标本的负压
结果显示,4%中性甲醛组和未固定组较为,理表想达率较               快速制片,阳性表达结果分别2为/3和5/8。未经固定标本
高,显色较清晰,值得推广应用。                                   在制片过程中红细胞几乎完全,其溶他解细胞有一定程度的
1　材料与方法                                                  肿胀。                         
111　材料　脱落细胞标本取自本科术中送检乳腺癌及其3　他             讨论                       
癌组织新鲜印片、穿刺涂片及恶性胸、腹水离心沉淀涂片在。                细胞涂片免疫组化制片程,序固中定液的选择对抗原
固定液采用4%中性甲醛9、5%乙醇、100%乙醇和乙醚混合              的保存至关重要,影响到酶标的表达。目前一般9常5%用
液(1∶1)、丙酮,分成4 组,另加一组未固定的新鲜脱落细胞           乙醇、乙醇和乙醚混合液、丙,就酮本等科应用情况而,其论
标本。固定时间分5为min、30min和24h不等。酶标试剂均             阳性表达率均不够理想。         
购自上海长岛试剂有限公司。                                          几种固定液固定效果对比研究结果,4显%中示性甲醛
112　方法　酶标采用EnVisio两n步法,一抗于4℃冰箱中孵            组阳性表达率明显高于其他固定,可液替组代上述其他几种
化过夜,二抗于室温中孵4化h(涂片标本为完整细,有胞完              固定液。未固定组阳性表达率仅4次%中于性甲醛组,说明
整的胞膜,标记抗体不易进入胞,所质需孵化时间长于石蜡             其抗原保存良好。               
切片,本科采用较长孵化时),间DAB 显色10min。4%中性                    笔者在以往的细胞涂片快速酶标制片试验,未中固发现
甲醛固定的标本于枸橼酸缓冲液中经微波或电饭煲抗定原新修              鲜涂片标本可进行酶标,制因片此,在本研究中设计了
复,其他标本未经抗原修复。各组标本来源、制片条件未和固方              定组。未固定涂片标本有较高的阳性,可表能达是率新
法相同。对部分4%中性甲醛固定的标本和未经固定的标               鲜涂片标本经干燥,细后胞水分蒸发,不会立即自溶或退,变
本进行了负压快速酶标制片,试一验、二抗孵化在Shandon             其组成成分的抗原性不会立刻,且消能失保存一段时间的缘
Excelsi全or自动脱水机反应缸内进,约行1/ 2个大气压,一、          故。用未固定标本进行酶标制片可以溶解,其红他细细胞胞
二抗反应时间各3为0min整, 个制片过程在室温中进行。主            也有一定程度的肿胀。           
要标记抗体CK、EMA 、CEA 及LCA 、LCK、c2erbB22、galect23i、n         负压快速酶标制片试验结果,显负示压可加速抗体孵化
HBME21、CA125等,大多数标本标记CK。                             过程,4%中性甲醛固定的标本和未经固定的新鲜标本可用
113　结果判定　胞质和/或胞膜显色明显,背景对比清晰为            于负压快速酶标制片。另,经外4%中性甲醛固定的标本须
阳性。                                                         经抗原修复,其机制与石蜡酶标制片相同。
2　结果                                                                                 (本文图1～3见插页第58页)
    各组总阳性表达:率未固定组10/20;4中% 性甲醛组                                              
12/ 209;5 %乙醇组4/ 20乙;醇和乙醚混合液4组/ 20丙;酮组                                        
4/ 20。结果显示,4 %中性甲醛组和未固定组阳性表达率明