- 楼主 发表于 2006-10-09 16:48|举报|关注(1)
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不同抗原修复液对免疫组化结果的影响
李 科 杨 红 徐 钢
(四川省人民医院病理科,成都 610072)
〔关键词〕 抗原修复液; 免疫组化
〔中图分类号〕 R446 〔文献标识码〕 A
以热处理来修复抗原是免疫组化(Immuno2 (+ ) ,界于二者之间的定为中度阳性 (6 ) ,无信
histochem istry , IH C)染色中常用的手段,但使 号表达定为阴性(-)。
用哪种修复液却存在不同的看法, 在长期工作实践
结 果
中, 我们发现不同的修复液对有些抗体表达的阳性
强度及数量有差异。为此, 本实验采用几种不同抗 1. Tris2H CL修复液阳性强度较差,非特异
性着色明显, 脱片率较高, 抗体ER 、PR 细胞浆
原修复液处理切片进行比较, 观察其对IHC 染色
有非特异性着色, 阳性细胞数量及强度(6- 7)。
结果的影响。
2. pH 610的柠檬酸修复液对显示细胞膜及细
材料和方法
胞浆的抗体敏感, 对显示细胞核的抗体较弱, 阳性
细胞数量及强度(+- 6)(图1), 抗体BRCA 无
1.材料 选择我院外科手术病检乳腺癌标本 1
表达(图2)。
5例,所有标本均经15 %缓冲甲醛液固定,石蜡包
3. pH 810的 ED TA对多数抗体敏感,尤其对
埋切片。相同病例的标本切片9 张, 分别用于三种
不同抗原修复液进行ER 、PR 、BRCA1标记。 显示细胞核的抗体较强, 阳性细胞数量及强度
(7 ) (图3) ,抗体B RCA1有表达 (6 ) (图4)。
2.试剂 抗体 ER、PR、B RCA1及 SP试剂
盒均为Dako 公司产品。
讨 论
3.修复液 柠檬酸缓冲液 (pH 610)、Tris2
目前在免疫组化实验中, 抗原修复是影响染色
H CL缓冲液 (pH 716)、ED TA缓冲液 (pH 810)。
结果最关键的因素。通常, 抗原修复效果的好坏取
4. 免疫组织化学染色采用SP 法 切片脱蜡
决于抗原修复液的组成成分及pH 值, 不同抗原需
入水,3%H2O2抑制内源性过氧化物酶10min, 水
要的最佳pH 值是不完全一样的。我们通过对上述
洗, 每例切片均经上述三种不同抗原修复液, 高压
三种修复液的对照实验中发现:Tris2HCL 对内源
处理修复抗原3min(喷气后计时) 和背景染色,
性生物素的反应影响最明显, 存在不同程度的非特
血清封闭, 滴加一抗,4 ℃冰箱孵育过夜; 次日用
异性着色, 脱片率较高, 这可能是由于在高温抗原
PB S洗涤 3m in ,滴加生物素化二抗 30m in; PB S
修复中盐酸的水解过度对组织结构和抗原弥散造成
洗涤;SP 试剂30min;DAB/H2O2 显色, 光镜下
的, 在实验中需要对内源性生物素进行有效的封闭
控制呈色; 自来水终止反应; 常规脱水封片。
处理以及彻底有效的洗涤方可缓解这一现象。常用
5.结果判断标准 D AB染色呈鲜明深棕黄色
pH 610的柠檬酸缓冲液对多数抗原 (显示细胞核)
或棕褐色定为强阳性(7), 浅棕黄色定为弱阳性
并非是最好的修复液, 不如pH710 的修复效果好,
〔收稿日期〕2005204228 〔修回日期〕2005207210 这可能是因为大部分抗原适合的修复环境接近活体
〔作者简介〕李科,男(1967年),汉族,技师。
细胞的pH 值(710-714)。由此可见, 不同抗原
--------------------------------------- 2
第1期 李 科等. 不同抗原修复液对免疫组化结果的影响 111
所需要最佳pH 值是不相同的, 应根据条件选择最
图 版 说 明
佳的pH 值, 这一点应引起重视。选用不同修复液 图1 乳腺浸润性导管癌, 柠檬酸缓冲液(pH610) 修复,
对同一实验结果影响很大, 尤其是对一些弱表达的
抗原, 很难显示出来, 延长显色时间易造成背景显 ER阳性着色 (+ -6 )。SP法 ×200
色过深。EDTA 适合大多数抗原修复, 特别对一 图2 乳腺浸润性导管癌, 柠檬酸缓冲液(pH610) 修复,
些显示细胞核的抗体如P53、ER 、PR 及较难表达 BRCA1阴性。SP法 ×200
的抗体如BRCA1, 效果更明显, 但其染色背景同 图3 乳腺浸润性导管癌,EDTA 缓冲液(pH810) 修复,
时加深, 如使用不当易造成假阳性结果的判断。我 ER阳性着色 (7 )。SP法 ×200
图4 乳腺浸润性导管癌,EDTA 缓冲液(pH610) 修复,
们尝试在经EDTA 修复后取消某些特殊抗体需要 BRCA1阳性着色 (6 )。SP法 ×200
作消化酶处理的步骤, 同样取得了很好的效果, 这
样就避免了因消化处理引起组织结构的破坏。从上 EXPLA NATIO N O F FIGURES
述三种不同修复液的结果分析表明, 碱性修复液在 Fig. 1 Invasive breastductalcarcinoma show s the positive
同等条件下染色效果更佳。值得注意的是没有任何 expression of estrogen receptor (+ -6 ). Citrate
一种修复液适合所有的抗体, 应根据不同的抗体选 buffer (pH 610) repair. SP method×200
Fig. 2 Invasive breastductalcarcinoma show sthe negative
用不同抗原修复液及不同的pH 值, 才能达到理想 expression ofBRCA1. Citrate buffer (pH 610) re2
的染色效果。 pair. SP method×200
参 考 文 献
Fig. 3 Invasive breastductalcarcinoma show s the positive
〔1〕熊正文, 史景泉, 王伯云. 抗原修复的常用技术及评 expression ofestrogen receptor (7 ). ED TA buffer
价. 中国组织化学与细胞化学杂志,1997,6(3): (pH 810) repair. SP method×200
3622364 Fig. 4 Invasive breastductalcarcinoma show s the positive
〔2〕贺占国,赵龙坡, 陈彦杰, 等. 抗原修复的种类、温 expression ofBRCA1. ED TA buffer (pH 810) re2
度及作用时间对抗原修复的影响. 诊断病理学杂志, pair. SP method×200
2002 , 9 (4): 248
不同抗原修复液对免疫组化结果的影响
李 科 杨 红 徐 钢
(四川省人民医院病理科,成都 610072)
〔关键词〕 抗原修复液; 免疫组化
〔中图分类号〕 R446 〔文献标识码〕 A
以热处理来修复抗原是免疫组化(Immuno2 (+ ) ,界于二者之间的定为中度阳性 (6 ) ,无信
histochem istry , IH C)染色中常用的手段,但使 号表达定为阴性(-)。
用哪种修复液却存在不同的看法, 在长期工作实践
结 果
中, 我们发现不同的修复液对有些抗体表达的阳性
强度及数量有差异。为此, 本实验采用几种不同抗 1. Tris2H CL修复液阳性强度较差,非特异
性着色明显, 脱片率较高, 抗体ER 、PR 细胞浆
原修复液处理切片进行比较, 观察其对IHC 染色
有非特异性着色, 阳性细胞数量及强度(6- 7)。
结果的影响。
2. pH 610的柠檬酸修复液对显示细胞膜及细
材料和方法
胞浆的抗体敏感, 对显示细胞核的抗体较弱, 阳性
细胞数量及强度(+- 6)(图1), 抗体BRCA 无
1.材料 选择我院外科手术病检乳腺癌标本 1
表达(图2)。
5例,所有标本均经15 %缓冲甲醛液固定,石蜡包
3. pH 810的 ED TA对多数抗体敏感,尤其对
埋切片。相同病例的标本切片9 张, 分别用于三种
不同抗原修复液进行ER 、PR 、BRCA1标记。 显示细胞核的抗体较强, 阳性细胞数量及强度
(7 ) (图3) ,抗体B RCA1有表达 (6 ) (图4)。
2.试剂 抗体 ER、PR、B RCA1及 SP试剂
盒均为Dako 公司产品。
讨 论
3.修复液 柠檬酸缓冲液 (pH 610)、Tris2
目前在免疫组化实验中, 抗原修复是影响染色
H CL缓冲液 (pH 716)、ED TA缓冲液 (pH 810)。
结果最关键的因素。通常, 抗原修复效果的好坏取
4. 免疫组织化学染色采用SP 法 切片脱蜡
决于抗原修复液的组成成分及pH 值, 不同抗原需
入水,3%H2O2抑制内源性过氧化物酶10min, 水
要的最佳pH 值是不完全一样的。我们通过对上述
洗, 每例切片均经上述三种不同抗原修复液, 高压
三种修复液的对照实验中发现:Tris2HCL 对内源
处理修复抗原3min(喷气后计时) 和背景染色,
性生物素的反应影响最明显, 存在不同程度的非特
血清封闭, 滴加一抗,4 ℃冰箱孵育过夜; 次日用
异性着色, 脱片率较高, 这可能是由于在高温抗原
PB S洗涤 3m in ,滴加生物素化二抗 30m in; PB S
修复中盐酸的水解过度对组织结构和抗原弥散造成
洗涤;SP 试剂30min;DAB/H2O2 显色, 光镜下
的, 在实验中需要对内源性生物素进行有效的封闭
控制呈色; 自来水终止反应; 常规脱水封片。
处理以及彻底有效的洗涤方可缓解这一现象。常用
5.结果判断标准 D AB染色呈鲜明深棕黄色
pH 610的柠檬酸缓冲液对多数抗原 (显示细胞核)
或棕褐色定为强阳性(7), 浅棕黄色定为弱阳性
并非是最好的修复液, 不如pH710 的修复效果好,
〔收稿日期〕2005204228 〔修回日期〕2005207210 这可能是因为大部分抗原适合的修复环境接近活体
〔作者简介〕李科,男(1967年),汉族,技师。
细胞的pH 值(710-714)。由此可见, 不同抗原
--------------------------------------- 2
第1期 李 科等. 不同抗原修复液对免疫组化结果的影响 111
所需要最佳pH 值是不相同的, 应根据条件选择最
图 版 说 明
佳的pH 值, 这一点应引起重视。选用不同修复液 图1 乳腺浸润性导管癌, 柠檬酸缓冲液(pH610) 修复,
对同一实验结果影响很大, 尤其是对一些弱表达的
抗原, 很难显示出来, 延长显色时间易造成背景显 ER阳性着色 (+ -6 )。SP法 ×200
色过深。EDTA 适合大多数抗原修复, 特别对一 图2 乳腺浸润性导管癌, 柠檬酸缓冲液(pH610) 修复,
些显示细胞核的抗体如P53、ER 、PR 及较难表达 BRCA1阴性。SP法 ×200
的抗体如BRCA1, 效果更明显, 但其染色背景同 图3 乳腺浸润性导管癌,EDTA 缓冲液(pH810) 修复,
时加深, 如使用不当易造成假阳性结果的判断。我 ER阳性着色 (7 )。SP法 ×200
图4 乳腺浸润性导管癌,EDTA 缓冲液(pH610) 修复,
们尝试在经EDTA 修复后取消某些特殊抗体需要 BRCA1阳性着色 (6 )。SP法 ×200
作消化酶处理的步骤, 同样取得了很好的效果, 这
样就避免了因消化处理引起组织结构的破坏。从上 EXPLA NATIO N O F FIGURES
述三种不同修复液的结果分析表明, 碱性修复液在 Fig. 1 Invasive breastductalcarcinoma show s the positive
同等条件下染色效果更佳。值得注意的是没有任何 expression of estrogen receptor (+ -6 ). Citrate
一种修复液适合所有的抗体, 应根据不同的抗体选 buffer (pH 610) repair. SP method×200
Fig. 2 Invasive breastductalcarcinoma show sthe negative
用不同抗原修复液及不同的pH 值, 才能达到理想 expression ofBRCA1. Citrate buffer (pH 610) re2
的染色效果。 pair. SP method×200
参 考 文 献
Fig. 3 Invasive breastductalcarcinoma show s the positive
〔1〕熊正文, 史景泉, 王伯云. 抗原修复的常用技术及评 expression ofestrogen receptor (7 ). ED TA buffer
价. 中国组织化学与细胞化学杂志,1997,6(3): (pH 810) repair. SP method×200
3622364 Fig. 4 Invasive breastductalcarcinoma show s the positive
〔2〕贺占国,赵龙坡, 陈彦杰, 等. 抗原修复的种类、温 expression ofBRCA1. ED TA buffer (pH 810) re2
度及作用时间对抗原修复的影响. 诊断病理学杂志, pair. SP method×200
2002 , 9 (4): 248
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