不同抗原修复液对免疫组化结果的影响（转）

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楼主发表于 2006-10-09 16:48|举报|关注(1)
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  不同抗原修复液对免疫组化结果的影响

                                          李　科　杨　红　徐　钢

                                        (四川省人民医院病理科,成都 610072)

　　　　〔关键词〕　抗原修复液; 　免疫组化

      　　〔中图分类号〕　R446 　　〔文献标识码〕　A

　　以热处理来修复抗原是免疫组化(Immuno2                       (+ ) ,界于二者之间的定为中度阳性 (6 ) ,无信

histochem istry , IH C)染色中常用的手段,但使                    号表达定为阴性(-)。

用哪种修复液却存在不同的看法, 在长期工作实践

                                                                                       结　　果
中, 我们发现不同的修复液对有些抗体表达的阳性

强度及数量有差异。为此, 本实验采用几种不同抗                         1. Tris2H CL修复液阳性强度较差,非特异

                                                                性着色明显, 脱片率较高, 抗体ER 、PR 细胞浆
原修复液处理切片进行比较, 观察其对IHC 染色

                                                                有非特异性着色, 阳性细胞数量及强度(6- 7)。
结果的影响。

                                                                     2. pH 610的柠檬酸修复液对显示细胞膜及细

                       材料和方法
                                                                胞浆的抗体敏感, 对显示细胞核的抗体较弱, 阳性

                                                                细胞数量及强度(+- 6)(图1), 抗体BRCA                    无
     1.材料　选择我院外科手术病检乳腺癌标本                                                                           1

                                                                表达(图2)。
5例,所有标本均经15 %缓冲甲醛液固定,石蜡包

                                                                     3. pH 810的 ED TA对多数抗体敏感,尤其对
埋切片。相同病例的标本切片9 张, 分别用于三种

不同抗原修复液进行ER 、PR 、BRCA1标记。                         显示细胞核的抗体较强, 阳性细胞数量及强度

                                                                (7 ) (图3) ,抗体B RCA1有表达 (6 ) (图4)。
     2.试剂　抗体 ER、PR、B RCA1及 SP试剂

盒均为Dako 公司产品。
                                                                                       讨　　论

     3.修复液　柠檬酸缓冲液 (pH 610)、Tris2

                                                                     目前在免疫组化实验中, 抗原修复是影响染色
H CL缓冲液 (pH 716)、ED TA缓冲液 (pH 810)。

                                                                结果最关键的因素。通常, 抗原修复效果的好坏取
　　4. 免疫组织化学染色采用SP 法　切片脱蜡

                                                                决于抗原修复液的组成成分及pH 值, 不同抗原需
入水,3%H2O2抑制内源性过氧化物酶10min, 水

                                                                要的最佳pH 值是不完全一样的。我们通过对上述
洗, 每例切片均经上述三种不同抗原修复液, 高压

                                                                三种修复液的对照实验中发现:Tris2HCL 对内源
处理修复抗原3min(喷气后计时) 和背景染色,

                                                                性生物素的反应影响最明显, 存在不同程度的非特
血清封闭, 滴加一抗,4 ℃冰箱孵育过夜; 次日用

                                                                异性着色, 脱片率较高, 这可能是由于在高温抗原
PB S洗涤 3m in ,滴加生物素化二抗 30m in; PB S

                                                                修复中盐酸的水解过度对组织结构和抗原弥散造成
洗涤;SP 试剂30min;DAB/H2O2 显色, 光镜下

                                                                的, 在实验中需要对内源性生物素进行有效的封闭
控制呈色; 自来水终止反应; 常规脱水封片。

                                                                处理以及彻底有效的洗涤方可缓解这一现象。常用
     5.结果判断标准　D AB染色呈鲜明深棕黄色

                                                                pH 610的柠檬酸缓冲液对多数抗原 (显示细胞核)
或棕褐色定为强阳性(7), 浅棕黄色定为弱阳性

                                                                并非是最好的修复液, 不如pH710 的修复效果好,

〔收稿日期〕2005204228 　〔修回日期〕2005207210                 这可能是因为大部分抗原适合的修复环境接近活体

〔作者简介〕李科,男(1967年),汉族,技师。
                                                                细胞的pH 值(710-714)。由此可见, 不同抗原

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　第1期　　　　　　　　　　　　李　科等. 不同抗原修复液对免疫组化结果的影响                                         111
所需要最佳pH 值是不相同的, 应根据条件选择最
                                                                                   图　版　说　明
佳的pH 值, 这一点应引起重视。选用不同修复液                     图1 　乳腺浸润性导管癌, 柠檬酸缓冲液(pH610) 修复,
对同一实验结果影响很大, 尤其是对一些弱表达的
抗原, 很难显示出来, 延长显色时间易造成背景显                          ER阳性着色 (+ -6 )。SP法　×200
色过深。EDTA 适合大多数抗原修复, 特别对一                       图2 　乳腺浸润性导管癌, 柠檬酸缓冲液(pH610) 修复,
些显示细胞核的抗体如P53、ER 、PR 及较难表达                           BRCA1阴性。SP法　×200
的抗体如BRCA1, 效果更明显, 但其染色背景同                       图3 　乳腺浸润性导管癌,EDTA 缓冲液(pH810) 修复,
时加深, 如使用不当易造成假阳性结果的判断。我                          ER阳性着色 (7 )。SP法　×200
                                                                图4 　乳腺浸润性导管癌,EDTA 缓冲液(pH610) 修复,
们尝试在经EDTA 修复后取消某些特殊抗体需要                             BRCA1阳性着色 (6 )。SP法　×200
作消化酶处理的步骤, 同样取得了很好的效果, 这
样就避免了因消化处理引起组织结构的破坏。从上                                EXPLA NATIO N O F FIGURES
述三种不同修复液的结果分析表明, 碱性修复液在                    Fig. 1　Invasive breastductalcarcinoma show s the positive
同等条件下染色效果更佳。值得注意的是没有任何                            expression of estrogen receptor (+ -6 ). Citrate
一种修复液适合所有的抗体, 应根据不同的抗体选                            buffer (pH 610) repair. SP method×200
                                                                Fig. 2　Invasive breastductalcarcinoma show sthe negative
用不同抗原修复液及不同的pH 值, 才能达到理想                             expression ofBRCA1. Citrate buffer (pH 610) re2
的染色效果。                                                            pair. SP method×200
                    参　考　文　献
                                                                Fig. 3　Invasive breastductalcarcinoma show s the positive
〔1〕熊正文, 史景泉, 王伯云. 抗原修复的常用技术及评                     expression ofestrogen receptor (7 ). ED TA buffer
     价. 中国组织化学与细胞化学杂志,1997,6(3):                           (pH 810) repair. SP method×200
     3622364                                                    Fig. 4　Invasive breastductalcarcinoma show s the positive
〔2〕贺占国,赵龙坡, 陈彦杰, 等. 抗原修复的种类、温                      expression ofBRCA1. ED TA buffer (pH 810) re2
     度及作用时间对抗原修复的影响. 诊断病理学杂志,                      pair. SP method×200
     2002 , 9 (4): 248

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