最近用07年的石蜡标本做基因突变检测，DNA抽提浓度可以，但PCR出的是SMEAR带，请各位高手出出招，超过2年以上的标本能不能做出来，还需要改善哪些条件？？？

谢谢！

 DNA在符合要求的石蜡包埋的样本中保存的还是很稳定的，我们5年内的样本都没问题。

PCR 没有扩增出来1.是和您的样本提取的DNA的含量和纯度有关，DNA提取之后一定要用可靠的核酸测定仪进行纯度和含量检测。检测纯度是避免由于DNA中含有的蛋白和RNA污染对PCR的影响，浓度的检测是为了确定PCR中加入的模板量，模板量过多或过少都会影响PCR的成功。2.是和您的引物有关，有些引物扩增效率高，有的低，您需要从几对引物中选一对扩增效率高的。一般您检测的基因小于1KB的话，DNA在石蜡里面的损伤不是主要考虑的因素。当然，如果样本不是符合要求的石蜡包埋的样本，例如没有用中性福尔马林固定，或接触过酸等，这样的样本DNA损伤大，可能也会P不出条带类。

 超过两年的蜡块做PCR应该是没有问题的，关键是这个蜡块当时制备时是否有及时固定：

你先看看在HE下形态如何，是否固定不好。

如果形态不错，当时的IHC也好，那就应该可以固定情况还可以，就更有信心了。

接下来就是要改进提取DNA的条件了，看看是否DNA提取有问题，你测的DNA浓度是用什么办法？有没有跑胶？

最后当然就是PCR条件了，你的PCR反应体系是否成熟也很关键。