DNA提取DNA简化步骤
石蜡白片:10um厚5~10张白片。
烤片:2-3h
二甲苯:10min,1h,10min
无水乙醇:5min,5min
95%乙醇:5min
90%乙醇:5min
85乙醇:5min
过清水数次:15~20min
根据HE染色结果,刮取白片上的肿瘤细胞部分,收集于2ml收集管中。
消 化
加入200ulBuffer TL和25ul 组织OB酶(Proteinase K),置于55℃水浴锅消化过夜。
(组织中)提取DNA
1.10000xg 离心5min,加入220ul Buffer BL,震荡混匀,置于70℃孵育10min。同时洗脱液也要预热(按照每管加50ul体积吸取一定量置1.5ml离心管中)。
2.加入220ul无水乙醇,震荡混合约20s,短离心。
3.将液体转移至收集柱里,8000xg 离心1min。
4.换新的收集管,加入500ul HB solution,离心1min,弃废液。
5.加入700ul 漂洗液后离心1min.
6.换新的收集管,重复步骤5,弃废液.
7.空离12000xg 2min
8.加洗脱液30-50ul(看刮下的组织多少),静置5min。后离心10000xg 1min。
后面根据自己的情况往下即可
DNA提取DNA简化步骤
石蜡白片:10um厚5~10张白片。
烤片:2-3h
二甲苯:10min,1h,10min
无水乙醇:5min,5min
95%乙醇:5min
90%乙醇:5min
85乙醇:5min
过清水数次:15~20min
根据HE染色结果,刮取白片上的肿瘤细胞部分,收集于2ml收集管中。
消 化
加入200ulBuffer TL和25ul 组织OB酶(Proteinase K),置于55℃水浴锅消化过夜。
(组织中)提取DNA
1.10000xg 离心5min,加入220ul Buffer BL,震荡混匀,置于70℃孵育10min。同时洗脱液也要预热(按照每管加50ul体积吸取一定量置1.5ml离心管中)。
2.加入220ul无水乙醇,震荡混合约20s,短离心。
3.将液体转移至收集柱里,8000xg 离心1min。
4.换新的收集管,加入500ul HB solution,离心1min,弃废液。
5.加入700ul 漂洗液后离心1min.
6.换新的收集管,重复步骤5,弃废液.
7.空离12000xg 2min
8.加洗脱液30-50ul(看刮下的组织多少),静置5min。后离心10000xg 1min。
后面根据自己的情况往下即可