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如何用蜡块提取DNA

stgowest 离线

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楼主 发表于 2008-12-22 19:28|举报|关注(0)
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如题!谢谢大家给些意见。用5um组织切片做的话,切片要怎么处理过的玻片?普通的,还是用多聚赖氨酸处理过的呢

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本帖最后由 于 2008-12-22 19:55:00 编辑
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寻找生命的奇迹 离线

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21 楼    发表于2011-12-24 06:46:21举报|引用
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  DNA提取DNA简化步骤

石蜡白片:10um510张白片。

烤片:2-3h

二甲苯:10min,1h10min

无水乙醇:5min,5min

95%乙醇:5min

90%乙醇:5min

85乙醇:5min

过清水数次:15~20min

根据HE染色结果,刮取白片上的肿瘤细胞部分,收集于2ml收集管中。 

  消 化

 加入200ulBuffer TL25ul 组织OB(Proteinase K),置于55水浴锅消化过夜。

 (组织中)提取DNA

1.10000xg 离心5min,加入220ul Buffer BL,震荡混匀,置于70孵育10min。同时洗脱液也要预热(按照每管加50ul体积吸取一定量置1.5ml离心管中)。

2.加入220ul无水乙醇,震荡混合约20s,短离心。

3.将液体转移至收集柱里,8000xg 离心1min

4.换新的收集管,加入500ul HB solution,离心1min,弃废液。

5.加入700ul 漂洗液后离心1min.

6.换新的收集管,重复步骤5,弃废液.

7.空离12000xg 2min

8.加洗脱液30-50ul(看刮下的组织多少),静置5min。后离心10000xg 1min

后面根据自己的情况往下即可

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狭路相逢,勇者胜
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